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喂食microRNA mimics和inhibitors研究昆蟲(chóng)miRNA調(diào)控發(fā)育的機(jī)制

日期:2012-11-27 07:55:51

棉鈴蟲(chóng)(Helicoverpa armigera),夜蛾科昆蟲(chóng)的一種,是棉花蕾鈴期的重要鉆蛀性害蟲(chóng),主要蛀食蕾、花、鈴,也取食嫩葉。MicroRNA是一類(lèi)非編碼小分子RNAs18-25 nt),其在各種生物進(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用,包括發(fā)育和基因調(diào)控。澳大利亞昆士蘭大學(xué)研究人員通過(guò)人工合成miRNA mimicsinhibitors對(duì)棉鈴蟲(chóng)特有的miRNA在發(fā)育繁殖過(guò)程中的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)研究*,研究結(jié)果發(fā)表在近期的Insect Biochem Mol Biol上。

 

首先,研究者通過(guò)對(duì)棉鈴蟲(chóng)的幼蟲(chóng)進(jìn)行高通量miRNA測(cè)序(聯(lián)川生物提供技術(shù)服務(wù)),發(fā)現(xiàn)5個(gè)在幼蟲(chóng)時(shí)期特異性表達(dá)的miRNA,并通過(guò)Northern雜交分析選定har-miR-2002b作為研究對(duì)象,利用生物學(xué)軟件預(yù)測(cè)出其作用的靶基因?yàn)榻z氨酸蛋白酶(Trypsin-like Serine ProteaseHa-TLP)。隨后,利用人工合成的inhibitormimic喂食棉鈴蟲(chóng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)inhibitormimic可成功地在棉鈴蟲(chóng)幼蟲(chóng)階段抑制或過(guò)表達(dá)har-MIR-2002。生物學(xué)測(cè)定表明,在喂食har-miR-2002b mimic的條件下,70%的幼蟲(chóng)繁殖力降低,40%的幼蟲(chóng)死亡;大部分幼蟲(chóng)成蛹畸形并且成蛾率極低。通過(guò)RT-PCR驗(yàn)證顯示,Ha-TLPhar-miR-2002b的靶基因。在體內(nèi)和體外的研究顯示,miRNA mimic作用下Ha-TLP轉(zhuǎn)錄本/蛋白水平和酶的活性顯著降低;相反,har-miR-2002b inhibitor作用下Ha-TLP轉(zhuǎn)錄本顯著上調(diào)。

 

上述研究表明,通過(guò)人工合成的miRNA mimicinhibitor可以抑制或過(guò)表達(dá)機(jī)體內(nèi)的miRNA,并可用于miRNA后續(xù)功能的研究。

 


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