桿狀病毒-昆蟲細胞表達與純化服務(wù)
桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統(tǒng)(BEVS)屬于真核表達系統(tǒng)的一種，該表達系統(tǒng)具有較高的安全性，并且基因組比較大，可以插入較大的外源基因，在大分子量的蛋白表達方面具有很大優(yōu)勢。并且具有完備的翻譯后加工修飾和高效表達外源基因的能力。該系統(tǒng)由轉(zhuǎn)移載體、桿狀病毒載體和宿主細胞組成。該系統(tǒng)采用一個或多個桿狀病毒的超強啟動子，將外源目的基因插入到啟動子后，獲得重組病毒，這種重組病毒在昆蟲細胞復(fù)制的同時，使外源基因得到高效表達。BEVS被廣泛應(yīng)用于病毒疫苗開發(fā)（如流感病毒和HPV疫苗開發(fā)）、信號蛋白制備、細胞因子制備、激酶開發(fā)等方面。
系統(tǒng)優(yōu)勢
- 基因容量大，可攜帶較大的基因片段，表達大分子量蛋白有優(yōu)勢；
- 安全性高，桿狀病毒具有嚴格的種屬特異性；
- 表達效率高，在被感染的晚期細胞中，蛋白可進行高效地表達；
- 表達產(chǎn)物的翻譯后修飾，尤其糖基化修飾與哺乳動物細胞類似，表達產(chǎn)物具有生物活性的可能性較高；
- 桿狀病毒較易擴增，可以大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白。
服務(wù)優(yōu)勢
- 華美生物獨有的表達體系，可實現(xiàn)bacmid低成本、大體積懸浮轉(zhuǎn)染，且滴度高,可用于感染放大制備蛋白，較經(jīng)典流程周期可縮短1-2周；
- 高性價比，價格低至6500元起；
- 貨期短：最短35工作日即可交付；
- 產(chǎn)量高，最高可達100mg/L。
我們承諾
注：該無風(fēng)險定制蛋白服務(wù)僅適用于800個氨基酸以內(nèi)的蛋白質(zhì)。如果您需要表達超過800個氨基酸的蛋白質(zhì)，我們將按步驟收費。
服務(wù)內(nèi)容
| 步驟 | 服務(wù)項目 | 服務(wù)說明 | 華美生物特色 | 周期 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 質(zhì)粒構(gòu)建
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密碼子優(yōu)化全基因合成 | 多載體優(yōu)化 為了提高表達成功率以及獲得更高表達量，進行多信號肽優(yōu)化，在確保純度的同時更大程度保證了蛋白的活性。 |
8-12工作日 | |
| PCR擴增產(chǎn)物通過酶切連接到pFastbac1等載體上 | |||||
| 轉(zhuǎn)化TOP10宿主 | |||||
| 獲得測序正確的重組質(zhì)粒 | |||||
| 2 | 重組Bacmid及高滴度病毒制備
 |
轉(zhuǎn)化DH10Bac構(gòu)建重組Bacmid，PCR鑒定，提取Bacmid。 | 懸浮轉(zhuǎn)染 懸浮轉(zhuǎn)染方式大大提高了蛋白表達量，有效縮短實驗周期 |
9-11工作日 | |
| 重組Bacmid轉(zhuǎn)染昆蟲細胞，得到P0代病毒，電泳檢測表達量，如有需要再將P0代病毒感染細胞得到P1-P2代病毒 | |||||
| 3 | 擴大表達與純化
 |
P1或p2代病毒感染昆蟲細胞 | 優(yōu)化表達 經(jīng)過優(yōu)化后，通過一步轉(zhuǎn)染培養(yǎng)最快5天內(nèi)即可得到大量的目的蛋白，低代數(shù)的病毒毒液感染細胞即可得到大量目的蛋白 |
8-10工作日 | |
| 通過親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白 | |||||
| 4 | 其他（可選）服務(wù)
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收費 | 酶切去除標簽服務(wù) | 靈活的附加服務(wù) 提供多種附加服務(wù)，客戶可根據(jù)實驗需求靈活選擇 |
3個工作日 |
| 免費 | 可提供無菌操作、內(nèi)毒素去除和凍干等服務(wù)（備注：凍干與無菌操作不可同時滿足） | 2個工作日 | |||
| 5 | 質(zhì)控
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進行純度、濃度等檢查，并提供QC報告 | 報告詳細 為每個項目提供產(chǎn)品說明書及完善的質(zhì)控報告 |
3-5工作日 | |
| 總時間 | 28-38工作日 | ||||
特色表達體系
● pFastbac1-KHM載體+sf9細胞高效表達
- 無縫克隆連接不懼任何內(nèi)切酶位點；
- N端含有10xHis較常規(guī)6xHis在IMAC中具有更強結(jié)合能力，同時含有凝血酶位點，可通過酶切去除標簽得到無標簽蛋白；
- C端含有MYC-tag可應(yīng)用于標簽抗體WB檢測，較His-tag具有更強靈敏度；
- Amp抗性篩選。
案例展示
案例1：昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)高效表達蛋白
采用桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統(tǒng)，該蛋白得到高效表達，細胞裂解液經(jīng)過SDS-PAGE檢測即可看到明顯條帶，經(jīng)過純化后檢測，該蛋白表達量高達20mg/L。
蛋白純化圖
泳道1：上樣后的穿透液
泳道2：細胞裂解液
泳道3：Marker
泳道4：30 mM咪唑洗脫液
泳道5：60 mM咪唑洗脫液
泳道6：250 mM咪唑洗脫液
案例2：昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)表達大分子量蛋白
該項目目的蛋白較大，客戶選擇基因合成，載體構(gòu)建，bacmid構(gòu)建及后期的蛋白表達純化均在我公司完成，最后該蛋白成功在sf9細胞中表達，表達量達到5mg/L，純度達到95%，客戶收到該蛋白經(jīng)過驗證后，對我們的產(chǎn)品質(zhì)量非常滿意。
蛋白純化圖
泳道1：60 mM咪唑洗脫
案例3：昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)表達小分子量蛋白
該蛋白分子量比較小，表達難度較高，采用我公司的pFastBac1-MBP載體進行融合表達后，融合蛋白成功表達，后經(jīng)過酶切和二次純化后，目的蛋白純度達到95%。
蛋白純化圖
泳道1：融合蛋白酶切前
泳道2：融合蛋白酶切后
泳道3：二次純化后
聯(lián)系信息
電話：027-87002556
Q Q：1031906505 
地址：武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道818號高科醫(yī)療器械園B11號2樓
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