ELISA酶聯免疫試劑盒的檢測靈敏度和特異性如何衡量？

日期：2025-04-23 10:06:45

檢測靈敏度通常用最低檢測限（LOD）來表示，即能夠可靠檢測到的目標物質的最低濃度。一般通過對一系列低濃度標準品進行檢測，計算出能夠產生顯著高于背景信號的最低濃度作為最低檢測限。特異性則通過交叉反應率來衡量，即試劑盒與其他結構相似或相關物質的反應程度。通常用與目標物質結構相似的其他物質進行檢測，計算其產生的信號與目標物質信號的比值，比值越低，說明特異性越高。

ELISA 酶聯免疫試劑盒的檢測靈敏度和特異性是衡量其性能的重要指標，以下是一些常見的衡量方法：

1.檢測靈敏度

最小檢測限（LOD）

方法：通過對一系列已知低濃度的標準品進行多次檢測（一般需檢測 20 次以上），計算出能與空白樣本顯著區分開的最低濃度。通常將空白樣本的均值加上 3 倍標準差所對應的濃度作為最小檢測限。

示例：如某 ELISA 試劑盒檢測某種細胞因子，對一系列稀釋度的細胞因子標準品進行檢測，當濃度為 0.1 pg/mL 時，其檢測值與空白樣本均值加上 3 倍標準差的值相等，那么該試劑盒對這種細胞因子的最小檢測限就是 0.1 pg/mL。

功能靈敏度（FS）

方法：在規定的精密度（如變異系數 CV≤20%）條件下，能夠準確檢測到的最低分析物濃度。一般通過對不同低濃度樣本進行重復檢測，計算其精密度，確定滿足精密度要求的最低濃度。

示例：對不同濃度的樣本進行多次檢測，當樣本濃度為 0.5 pg/mL 時，檢測結果的 CV 為 15%，滿足精密度要求，而當濃度再降低時 CV 超過 20%，則該試劑盒的功能靈敏度為 0.5 pg/mL。

2.檢測特異性

交叉反應率

方法：用試劑盒檢測與目標分析物結構相似的其他物質，計算其產生的信號與目標分析物信號的比值，以百分數表示。通常選擇與目標物結構類似的多種物質進行檢測。

示例：試劑盒用于檢測甲蛋白，用其檢測與甲蛋白結構相似的乙蛋白和丙蛋白，若乙蛋白產生的信號是甲蛋白的 5%，丙蛋白產生的信號是甲蛋白的 3%，則該試劑盒對乙蛋白的交叉反應率為 5%，對丙蛋白的交叉反應率為 3%。交叉反應率越低，說明試劑盒的特異性越好。

特異性試驗

方法：采用已知不含目標分析物的樣本（如正常人血清、細胞培養上清等），用試劑盒進行檢測，觀察是否有假陽性結果出現。同時，用含有目標分析物的樣本進行檢測，觀察是否能準確檢測到（真陽性）。

示例：用 100 份已知不含目標蛋白的正常人血清進行檢測，若有 5 份出現陽性結果，則假陽性率為 5%；用 100 份含有目標蛋白的樣本進行檢測，若有 95 份檢測為陽性，則真陽性率為 95%。特異性好的試劑盒應具有低假陽性率和高真陽性率。

通過以上方法可以較為全面地衡量 ELISA 酶聯免疫試劑盒的檢測靈敏度和特異性，從而評估試劑盒的質量和適用性。