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酵母雙雜交系統研究蛋白質相互作用的方法

日期:2023-06-07 14:05:46


    酵母雙雜交系統是研究蛋白質相互作用的方法,它利用酵母細胞內的轉錄因子結構域來檢測蛋白質—蛋白質相互作用。
 
    酵母雙雜交系統的基本原理是利用酵母雙雜交鑒定(Y2H)法進行篩選。該方法利用酵母細胞中的兩個分子,一個稱為“魚鉤”,它需要連接到目標蛋白質的N末端,另一個稱為“誘餌”,它需要連接到目標蛋白質的C末端。當魚鉤和誘餌連接時,它們會組成一個轉錄激活因子的功能性域,從而激活一些下游基因的轉錄。


蛋白互作

 
    酵母雙雜交系統研究蛋白互作步驟如下:
 
    1、構建酵母表達載體:將誘餌基因和魚鉤基因克隆到不同的酵母表達載體中。
 
    2、轉化酵母細胞:將誘餌表達載體和魚鉤表達載體同時轉化到同一株酵母細胞內。
 
    3、篩選陽性菌落:在選擇培養基上生長細胞,檢測是否出現了青白色小菌落。
 
    4、鑒定蛋白質相互作用:通過對篩選出的菌落進行進一步的測試和驗證,確定哪些蛋白質相互作用。


酵母雙雜系統

 
    酵母雙雜交系統有許多優點:
 
    1、快速:該方法能夠快速、高通量地篩選蛋白質相互作用。
 
    2、靈敏:檢測蛋白質—蛋白質交互作用所需的電信號很小,因此酵母雙雜交系統通常能夠檢測到相互作用的形成。
 
    3、特異性:酵母雙雜交系統能夠特異地識別蛋白質相互作用,避免假陽性結果的出現。


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