畢赤酵母表達載體鏈接與構建原理
日期:2023-07-07 16:10:49
畢赤酵母(Pichia pastoris)是常用的真菌表達系統,它廣泛應用于蛋白質表達和生產。畢赤酵母表達載體是將目標基因插入到畢赤酵母中,以便在該菌株中高效表達。
構建畢赤酵母表達載體的主要原理包括以下幾個步驟:
選擇適當的載體:選擇一個合適的畢赤酵母表達載體,常見的載體包括pPICZ、pPINK、pGAPZ等。這些載體通常包含了必需的元件,如啟動子、選通子、終止子和選擇性標記等。
基因插入:將目標基因克隆到表達載體的多克隆位點之一。可以使用限制酶切和連接酶切片段的方法,將目標基因與載體連接成重組DNA。
轉化畢赤酵母:將重組載體DNA導入到畢赤酵母細胞中。這可以通過電穿孔、化學轉化或冷凍轉化等方法實現。
篩選正變異子:經過轉化后,采用適當的篩選方法選擇含有目標基因的正變異子(transformant)。常見的篩選方法包括抗生素篩選、染色篩選或功能性篩選等。
表達目標蛋白:選取高表達的正變異子,通過培養和酶誘導等條件,使其高效表達目標蛋白。這通常需要優化培養基組分、培養溫度和酶誘導時間等參數。
畢赤酵母表達載體構建原理是在適當的載體上插入目標基因,并將重組載體導入到畢赤酵母細胞中,經過篩選得到正變異子,最終使其在適當的培養條件下高效表達目標蛋白。這種系統具有高表達水平、易操作和簡單培養等優點,因此被廣泛應用于蛋白質表達和生產領域。