超濾管濃縮上清提取外泌體的方法
日期:2023-06-20 16:19:38
一、實驗目的
本實驗旨在通過超濾管濃縮上清提取外泌體,得到高質量的外泌體進行后續研究。
二、實驗原理
超濾管濃縮是一種常用的樣品濃縮方法,其利用濾膜在物理上限制溶質的通過,將大量的水相液體從富集的毛細管中移除,以達到濃縮的目的。在提取外泌體的實驗中,超濾管濃縮可以去除上清中的大分子物質,并將外泌體濃縮于少量的上清中,提高提取效率。具體步驟如下:
三、實驗材料和方法
1、實驗材料
(1)DMEM/F12培養基
(2)FBS
(3)Pen/Strep
(4)上清
(5)PBS緩沖液
(6)0.22μm的過濾器
(7)Amicon Ultra-15或30 mL Centrifugal Filter Unit
(8)離心機
2、實驗步驟
(1)將上清加入超濾管,使用0.22μm的過濾器進行預先過濾,以除去大分子雜質。
(2)將離心管加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中,注意不要讓超濾管中的上清溢出。
(3)使用PBS緩沖液對上清進行洗滌,將PBS溶液加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中,并離心盤離心,將液體流出并重復兩次以上。
(4)加入PBS緩沖液至Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit頂端的標記處,離心機以3000 rpm離心10分鐘,重復此步驟直至上清濃縮至2-3 mL。
(5)將上清轉移到新的離心管中,使用低速離心去除細胞碎片和沉淀,然后將上清收集起來,即可得到濃縮的外泌體樣品。
四、實驗結果及分析
本實驗通過超濾管濃縮上清提取外泌體,濃縮效果明顯,實驗中的上清可得到較高濃度的外泌體。經過離心去除細胞碎片和沉淀等處理,最終得到的外泌體樣品純度高且質量穩定,可以用于進一步的研究工作。
五、實驗注意事項
(1)操作前要做好消毒措施,避免污染樣品和實驗工作區。
(2)使用Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit時,注意不要讓超濾管中的上清溢出。
(3)濃縮過程中,PBS緩沖液應逐步加入,避免對細胞產生不必要的影響。
(4)最終得到的外泌體樣品需要儲存在低溫下,避免熱和其他因素的影響。
(5)在操作過程中,應仔細觀察實驗結果,及時處理異常情況。
六、實驗總結
通過本次實驗,我們掌握了一種將超濾管濃縮應用于提取外泌體的方法,該方法簡單易行,濃縮效果顯著。同時,在實驗過程中,我們也遇到了一些問題,如上清溢出、操作不規范等,這些問題都提醒我們在實驗時要更加仔細地操作,保障實驗結果的準確性和可靠性。
本實驗旨在通過超濾管濃縮上清提取外泌體,得到高質量的外泌體進行后續研究。
二、實驗原理
超濾管濃縮是一種常用的樣品濃縮方法,其利用濾膜在物理上限制溶質的通過,將大量的水相液體從富集的毛細管中移除,以達到濃縮的目的。在提取外泌體的實驗中,超濾管濃縮可以去除上清中的大分子物質,并將外泌體濃縮于少量的上清中,提高提取效率。具體步驟如下:
三、實驗材料和方法
1、實驗材料
(1)DMEM/F12培養基
(2)FBS
(3)Pen/Strep
(4)上清
(5)PBS緩沖液
(6)0.22μm的過濾器
(7)Amicon Ultra-15或30 mL Centrifugal Filter Unit
(8)離心機
2、實驗步驟
(1)將上清加入超濾管,使用0.22μm的過濾器進行預先過濾,以除去大分子雜質。
(2)將離心管加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中,注意不要讓超濾管中的上清溢出。
(3)使用PBS緩沖液對上清進行洗滌,將PBS溶液加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中,并離心盤離心,將液體流出并重復兩次以上。
(4)加入PBS緩沖液至Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit頂端的標記處,離心機以3000 rpm離心10分鐘,重復此步驟直至上清濃縮至2-3 mL。
(5)將上清轉移到新的離心管中,使用低速離心去除細胞碎片和沉淀,然后將上清收集起來,即可得到濃縮的外泌體樣品。
四、實驗結果及分析
本實驗通過超濾管濃縮上清提取外泌體,濃縮效果明顯,實驗中的上清可得到較高濃度的外泌體。經過離心去除細胞碎片和沉淀等處理,最終得到的外泌體樣品純度高且質量穩定,可以用于進一步的研究工作。
五、實驗注意事項
(1)操作前要做好消毒措施,避免污染樣品和實驗工作區。
(2)使用Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit時,注意不要讓超濾管中的上清溢出。
(3)濃縮過程中,PBS緩沖液應逐步加入,避免對細胞產生不必要的影響。
(4)最終得到的外泌體樣品需要儲存在低溫下,避免熱和其他因素的影響。
(5)在操作過程中,應仔細觀察實驗結果,及時處理異常情況。
六、實驗總結
通過本次實驗,我們掌握了一種將超濾管濃縮應用于提取外泌體的方法,該方法簡單易行,濃縮效果顯著。同時,在實驗過程中,我們也遇到了一些問題,如上清溢出、操作不規范等,這些問題都提醒我們在實驗時要更加仔細地操作,保障實驗結果的準確性和可靠性。
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