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超濾管濃縮上清提取外泌體的方法

日期:2023-06-20 16:19:38

一、實驗目的
 
    本實驗旨在通過超濾管濃縮上清提取外泌體,得到高質量的外泌體進行后續研究。
 
二、實驗原理
 
    超濾管濃縮是一種常用的樣品濃縮方法,其利用濾膜在物理上限制溶質的通過,將大量的水相液體從富集的毛細管中移除,以達到濃縮的目的。在提取外泌體的實驗中,超濾管濃縮可以去除上清中的大分子物質,并將外泌體濃縮于少量的上清中,提高提取效率。具體步驟如下:
 
三、實驗材料和方法
 
1、實驗材料
    (1)DMEM/F12培養基
 
    (2)FBS
 

    (3)Pen/Strep
 

    (4)上清
 

    (5)PBS緩沖液
 

    (6)0.22μm的過濾器
 

    (7)Amicon Ultra-15或30 mL Centrifugal Filter Unit
 

    (8)離心機
 
2、實驗步驟

    (1)將上清加入超濾管,使用0.22μm的過濾器進行預先過濾,以除去大分子雜質。
 

    (2)將離心管加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中,注意不要讓超濾管中的上清溢出。
 

    (3)使用PBS緩沖液對上清進行洗滌,將PBS溶液加入Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit中,并離心盤離心,將液體流出并重復兩次以上。
 

    (4)加入PBS緩沖液至Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit頂端的標記處,離心機以3000 rpm離心10分鐘,重復此步驟直至上清濃縮至2-3 mL。
 

    (5)將上清轉移到新的離心管中,使用低速離心去除細胞碎片和沉淀,然后將上清收集起來,即可得到濃縮的外泌體樣品。
 
四、實驗結果及分析
 

    本實驗通過超濾管濃縮上清提取外泌體,濃縮效果明顯,實驗中的上清可得到較高濃度的外泌體。經過離心去除細胞碎片和沉淀等處理,最終得到的外泌體樣品純度高且質量穩定,可以用于進一步的研究工作。
 
五、實驗注意事項
 

    (1)操作前要做好消毒措施,避免污染樣品和實驗工作區。
 

    (2)使用Amicon Ultra-15/30 mL Centrifugal Filter Unit時,注意不要讓超濾管中的上清溢出。
 

    (3)濃縮過程中,PBS緩沖液應逐步加入,避免對細胞產生不必要的影響。
 

    (4)最終得到的外泌體樣品需要儲存在低溫下,避免熱和其他因素的影響。
 

    (5)在操作過程中,應仔細觀察實驗結果,及時處理異常情況。
 
六、實驗總結
 
    通過本次實驗,我們掌握了一種將超濾管濃縮應用于提取外泌體的方法,該方法簡單易行,濃縮效果顯著。同時,在實驗過程中,我們也遇到了一些問題,如上清溢出、操作不規范等,這些問題都提醒我們在實驗時要更加仔細地操作,保障實驗結果的準確性和可靠性。


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