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小鼠ctnnb1單克隆抗體制備實驗

日期:2023-05-17 14:58:57


    xCTNNB1是β-catenin蛋白,是Wnt信號通路的重要成員,參與胚胎發育、細胞極性和腫瘤生成等生物學過程。本文將介紹小鼠ctnnb1單克隆抗體的制備實驗流程。
 
實驗材料:
 
1、BALB/c小鼠
2、CTNNB1蛋白(包括GST-CTNNB1蛋白)
3、Freunds完全佐劑和不完全佐劑
4、酚紅溶液

實驗步驟:
 
1、免疫誘導
    將1mg的CTNNB1蛋白與Freund's完全佐劑混合后注射到小鼠的腹腔,第二周再注射100ug同種蛋白與Freund's不完全佐劑混合。共進行3次免疫誘導,間隔1-3周。
 
2、淋巴結細胞融合
    將小鼠的脾臟取出制備成單細胞懸液,并用巨噬細胞清除污染的樣本,最終將脾細胞與SP2/0或其他骨髓瘤細胞融合,加入PEG中,洗滌后再用無血清培養基進行培養,篩選出抗體陽性的雜交瘤細胞。
 
3、克隆分離
    將雜交瘤細胞進行單克隆分離,方法包括限制性稀釋、微孔培養等。每個克隆細胞用于分泌抗體的能力和特定性質的評估。
 
4、抗體純化
    將克隆細胞分泌的抗體進行收集和純化。首先采用酒精沉淀或其他方法收集培養基,然后再進行親和層析等方法進行純化。
 
5、抗體鑒定
    利用Western blot、ELISA等實驗方法對制備的抗體進行鑒定,包括特異性、親和力等指標的驗證。
 
6、抗體應用
    將制備好的抗體應用于特定的實驗中,例如免疫組化、蛋白質印跡等。
 
注意事項:
 
    1、免疫誘導過程中需要控制小鼠的健康狀況和免疫劑量,防止過度刺激導致過敏等問題。
    2、雜交瘤細胞的選擇需要考慮細胞的穩定性和分泌抗體的能力等因素,建議進行多次篩選和評估。
    3、抗體的純化過程需要嚴格控制溫度、pH值等因素,防止抗體失活或精度下降。
    4、抗體應用過程中需要進行多次驗證和比對,確保結果的可靠性和準確性。

    小鼠ctnnb1單克隆抗體制備是一項復雜而又重要的實驗,需要仔細進行并注意各種問題的控制。通過合理的實驗設計和操作方法,可以獲得高質量的單克隆抗體,并為后續的研究提供有力的支持。


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