在线日韩日本国产亚洲丨少妇伦子伦情品无吗丨欧美性猛交xxxx免费看蜜桃丨精品人妻系列无码一区二区三区丨亚洲精品无码不卡在线播放

Your Good Partner in Biology Research

Native-PAGE常見問題分析

日期:2010-08-03 14:35:00

1. 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳時預電泳是怎么回事的?預電泳時要加6×DNA上樣緩沖液嗎?電泳1-2小時再加結合反應產物嗎?

預電泳是除去凝膠中沒有聚合的單體和雙體和聚合引發劑,提高分辨率,不加任何物質,一般30-60分鐘后加樣電泳。

2. 銀染的步驟是什么?銀染的關鍵因素是什么?

步驟是:

(1) 固定:10%冰乙酸30min。

(2) 清洗:雙蒸水沖洗凝膠2次,每次1min。

(3) 染色:染色液(1g硝酸銀,1.5ml 37%甲醛,1l 雙蒸水。現配)染色30min。

(4) 清洗:迅速洗凝膠1次。

(5) 顯影:30g碳酸鈉,1.5ml 37%甲醛,200μl 10mg/l 硫代硫酸鈉。顯影至清晰帶紋出現。

成功銀染的關鍵因素包括:

(1) 用超純水(比如,NANOpure或Milli-Q純化)或者是雙蒸水作銀染。

(2) 用提供的碳酸鈉或者ACS試劑級的碳酸鈉。

(3) 在染色后,水清洗所用時間的長短很重要,用不超過5-10秒的時間清洗膠,然后放入顯色溶液中,一般在水里浸一下就好。

(4) 甲醛和硫代硫酸鈉(400μl/1ml)在使用前,及時加入到顯色液中。

(5) 在使用前及時配染色液。

3. 變性PAGE的上樣緩沖液配方?如何準備上樣的蛋白?是將細胞用超聲破碎,還是用細胞裂解液,大多細胞裂解液中均含有SDS,不知有沒有用于非變性PAGE的裂解液.具有操作步驟是什么?

非變性的PAGE buffer就是0.5xTBE,上樣緩沖液可以用普通的loading buffer,含有Tris,溴芬蘭以及甘油即可,甘油是主要的沉淀作用成分。都可以自己配。細胞超聲即可,超聲后離心取上清.也有配NATIVE-PAGE gel所用buffer為1*TBE,用的running buffer也是1*TBE。還有一點就是要在配gel時考慮能使蛋白多聚體穩定的因素。

4. 做了naive---PAGE沒有條帶,蛋白質是純品,分子量很大,怎么回事呢?

因為分子量很大,8%的膠濃度較合適。加樣時加個marker,可以檢測膠制備是否有問題。銀染方法比較靈敏,如果蛋白是一種酶,且可使某種底物顯色的話,可以用活性染色試試,更靈敏。


主站蜘蛛池模板: 亚洲人禽杂交av片久久| 亚洲国产美女精品久久久久∴| 国产色诱视频在线观看| 免费观看国产小粉嫩喷水| 无码毛片一区二区本码视频| 少妇人妻无码专区毛片| 宅男噜噜噜66网站在线观看| 亚洲最大的熟女水蜜桃av网站| 99er热精品视频| 亚洲婷婷五月综合狠狠爱| 国产日产欧产精品精品| 性av盈盈无码天堂| 免费无码又爽又刺激软件下载直播| 成在人线av无码免费| 国产色播av在线观看| 一本精品99久久精品77| 99热成人精品国产免费| 国产成人无码一区二区三区 | 国产精品免费精品自在线观看| 中国国产野外1级毛片视频| 成人污污污www网站免费| 国产精品99久久久久久久女警| 久久www免费人成精品| 制服视频在线一区二区| 人妻熟妇乱又伦精品视频无广告| 女人高潮抽搐喷液30分钟视频| 久久国产精品免费一区二区三区| 免费国产黄网在线观看| 国产精品久久人妻无码| 图片小说视频一区二区| 精品国产三级a在线观看| 无码纯肉动漫在线观看| 18禁免费无码无遮挡不卡网站| 无码av天天av天天爽| 婷婷色综合视频在线观看| 大黑人交xxxx18视频| 少妇愉情理伦片高潮日本| 国产午夜精品一区二区三区漫画| 亚洲人成伊人成综合网久久久| 天天躁日日躁狠狠很躁| 狠狠躁夜夜躁无码中文字幕|