日期:2010-08-03 14:34:20
非變性凝膠電泳,也稱為天然凝膠電泳,與非變性凝膠電泳最大的區(qū)別就在于蛋白在電泳過程中和電泳后都不會變性。最主要的有以下幾點: 1. 凝膠的配置中非變性凝膠不能加入SDS,而變性凝膠的有SDS。 2. 電泳載樣緩沖液中非變性凝膠的不僅沒有SDS,也沒有巰基乙醇。 3. 在非變性凝膠中蛋白質(zhì)的分離取決于它所帶的電荷以及分子大小,不像SDS-PAGE電泳中蛋白質(zhì)分離只與其分子量有關(guān)。 4. 非變性凝膠電泳中,酸性蛋白和堿性蛋白的分離是完全不同的,不像SDS-PAGE中所有蛋白都朝正極泳動。非變性凝膠電泳中堿性蛋白通常是在微酸性環(huán)境下進行,蛋白帶正電荷,需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。 5. 因為是非變性凝膠電泳,所有的電泳時候電流不能太大,以免電泳時產(chǎn)生的熱量太多導致蛋白變性,而且步驟都要在0-4度的條件下進行,這樣才可以保持蛋白質(zhì)的活性,也可以降低蛋白質(zhì)的水解作用。這點跟變性電泳也不一樣。 所以與SDS-PAGE電泳相比,非變性凝膠大大降低了蛋白質(zhì)變性發(fā)生的機率。 |
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