在线日韩日本国产亚洲丨少妇伦子伦情品无吗丨欧美性猛交xxxx免费看蜜桃丨精品人妻系列无码一区二区三区丨亚洲精品无码不卡在线播放

Your Good Partner in Biology Research

挑出CpG甲基化位點的新策略

日期:2014-06-18 09:11:27

 

DNA甲基化是基因表達的一種有效的調節器。DNA甲基化主要發生在富含CG的區域,所以稱為CpG。如CpG島位于某基因的啟動子區域,CpG島的甲基化會顯著降低甚至完全沉默該基因的轉錄,繼而影響蛋白的表達。但是,如何決定一個目標位點的甲基化是否會影響轉錄,是具有挑戰性的。最近,約翰霍普金斯大學的研究人員研制出一種新方法,可以闡明這個問題。

 

CpG二核苷酸上的DNA甲基化,是真核生物中被充分研究過的一種表觀遺傳轉錄調控機制。通常,這種形式的甲基化涉及到多個位點,但是單個CpG位點的甲基化也會影響基因的表達。為了促進單一位點甲基化研究的發展,約翰霍普金斯大學的Marc Ostermeier和他以前的研究生Brian Chaikind,開發出一種新技術,可以選擇優化的位點特異性DNA甲基轉移酶,相關研究結果發表在最近的《PLoS One》。

 

Ostermeier的這種最新方法以其研究小組以前描述過的一種方法為基礎,利用一種裂開的CpG甲基轉移酶——M.SssI,與可識別目標CpG位點側翼序列的鋅指結構域(ZFD)熔合在一起。

 

Ostermeier解釋說:“我們的想法是,分裂甲基轉移酶,這樣它就再也不能很有效地組裝,然后你用DNA作為模板,在你想要甲基化的位點上,幫助組裝甲基轉移酶。因此,你增加了這兩半甲基轉移酶的局部濃度,可以化解它們沒有組裝好這一問題。然后,它們可以組裝和甲基化那個位點。”

 

雖然Ostermeier的方法增加了期望CpG位點的甲基化,但仍然有明顯脫離目標的CpG甲基化。因此,在最新的進展中,他和Chaikind轉向努力降低非特異性DNA甲基化,同時保持目標位點甲基化。

 

新方法利用一個誘變的質粒文庫,這些質粒包含N末端M.SssI片段/ZFD熔合的編碼基因和C末端M.SssI片段/ZFD熔合的編碼基因。C末端M.SssI片段,在5個選定的殘基上攜帶隨機變異,研究人員推測,這會減少其DNA的親合力,而不影響催化活性。

 

利用位于甲基化敏感的FspI限制位點(兩側是鋅指結合序列)的質粒中的目標CpG位點,研究人員選擇來自FspI消化的甲基化依賴保護。然后,他們增加了創新的一步,利用與眾不同的限制酶McrBC,針對非特異性的甲基化。McrBC可消化包含兩個不同甲基化位點(而不僅僅是一個單一甲基化位點)的DNA,導致在目標CpG位點以外的一個或多個CpG位點甲基化的任何質粒DNA被消化。

 

FspIMcrBC消化后,核酸外切酶III消化會破壞任何裂開的質粒,留下編碼高度特異性M.SssI片段/鋅指熔合蛋白的完整質粒,用于另一輪的轉換和選擇。

 

從他們篩選中識別出的47個變體中,作者得到了一種優化的DNA甲基轉移酶,能顯著降低非特異性甲基化60倍,目標特異性甲基化降低很少,僅從94%降到了79%

 

ChaikindOstermeier通過交換鋅指結構域,繼續顯示他們系統的多功能性,這些結構域結合有人類細胞間黏附分子1ICAM1)基因啟動子區中的一個特異CpG位點的側翼序列,表明該位點被甲基化,但是非目標位點卻沒有。

 

目前,該研究小組計劃在真核細胞中靶定那個單一的ICAM1 CpG位點,以檢測其位點特異性甲基化是否像其他研究顯示的那樣,會影響ICAM1的表達,也將驗證這種位點特異性CpG甲基轉移酶在真核生物研究中的效用。

 


主站蜘蛛池模板: 国产精品揄拍100视频| 高中国产开嫩苞实拍视频在线观看| 久久日本片精品aaaaa国产| 国产综合无码一区二区色蜜蜜| 五月天激情电影| 国产精品美脚玉足脚交| 久久亚洲日韩精品一区二区三区 | 中国女人内射6xxxxx| 秋霞电影网午夜鲁丝片无码| 久久午夜无码鲁丝片直播午夜精品| 美女视频黄频大全免费| 亚洲va久久久噜噜噜久久狠狠 | 99riav国产精品视频| 全部露出来毛走秀福利视频| 国产精品99爱免费视频| 特级做a爰片毛片免费69| 国产综合色产在线精品 | 强制高潮18xxxxhd日韩| 妓院一钑片免看黄大片| 精品亚洲国产成av人片传媒| 伊人伊成久久人综合网996| 国产18禁黄网站免费观看| 天码av无码一区二区三区四区| 中文字幕av久久激情亚洲精品| 国产免费久久精品99reswag| 粗大的内捧猛烈进出在线视频| 欧美高清freexxxx性| 乱人伦视频中文字幕| 性xxxx欧美老妇胖老太性多毛 | 狠狠色综合网久久久久久| 亚洲成片在线观看12345| 人人澡人人澡人人看添av| 国产精品日本一区二区不卡视频| 国产农村妇女精品一二区| 麻豆视传媒精品av| 久久婷婷五月综合国产尤物app| 搡老岳熟女国产熟妇| 国产成人欧美亚洲日韩电影| 又粗又黄又爽视频免费看 | 狠狠躁夜夜躁无码中文字幕| 精品免费国产一区二区三区四区介绍 |