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Nature方法:細(xì)胞信號追蹤新技術(shù)

日期:2013-07-12 09:05:17

來自紀(jì)念斯隆-凱特琳癌癥中心的研究人員,與德國的合作者們一起,開發(fā)出了一種在多細(xì)胞環(huán)境中鑒別胞內(nèi)蛋白及分泌蛋白來源細(xì)胞的新方法。該研究在線發(fā)布在630日的《自然方法》(Nature Methods)雜志上。

 

多細(xì)胞環(huán)境的形成及維持有賴于廣泛的細(xì)胞間相互通訊。細(xì)胞相互作用調(diào)控失常在包括癌癥在內(nèi)的許多疾病中起重要作用。盡管抗體分析被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究中,但這種方法相對低通量,特異性差異大,且需要預(yù)先選擇蛋白質(zhì)讀數(shù)。盡管以定量質(zhì)譜為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)組學(xué)克服了其中的一些限制,由于無法區(qū)分多細(xì)胞培養(yǎng)物中來自不同細(xì)胞類型的蛋白質(zhì),用質(zhì)譜法進(jìn)行細(xì)胞通訊研究受到阻礙。

 

研究人員開發(fā)了一種稱作為CTAP細(xì)胞選擇性蛋白質(zhì)組學(xué)新技術(shù),是基于脊椎細(xì)胞無法合成生長及維持穩(wěn)態(tài)通常所需的一些“必需”氨基酸這一事實(shí)。這些氨基酸可由某些植物、細(xì)菌和低等真核生物生成,被添加到培養(yǎng)脊椎動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中,動(dòng)物需通過飲食來獲取它們。

 

GauthierMiller和合作者們操控細(xì)胞表達(dá)一些氨基酸生物合成酶,這使得細(xì)胞能夠利用添加的氨基酸前體來生成必需氨基酸,滿足自身生長需要。

 

研究小組證實(shí),通過添加重穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸前體,可導(dǎo)致重同位素標(biāo)記氨基酸摻入到酶表達(dá)細(xì)胞生成的蛋白質(zhì)中。利用定量質(zhì)譜搜索包含這些穩(wěn)定同位素標(biāo)記的蛋白質(zhì),研究人員能夠確定多細(xì)胞培養(yǎng)物中胞內(nèi)蛋白質(zhì)和分泌蛋白質(zhì)的來源細(xì)胞。

 

這一技術(shù)突破為研究人員提供了一個(gè)綜合繪制細(xì)胞通訊圖譜的新工具,細(xì)胞之間相互通訊對于癌癥形成、維持及治療反應(yīng)各個(gè)方面均至關(guān)重要。例如,利用這一方法研究人員可以研究正常細(xì)胞和惡性細(xì)胞之間的細(xì)胞信號傳導(dǎo)事件,從而更好地了解周圍正常細(xì)胞改變腫瘤生長以及治療反應(yīng)的分子機(jī)制。

 

由于能將蛋白質(zhì)與特殊細(xì)胞類型直接關(guān)聯(lián)起來,研究人員認(rèn)為這一方法將能夠適用于研究細(xì)胞間的通訊及發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)記物。

 


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