中科院Nature子刊iPS細胞理想來源
日期:2012-11-12 09:14:34
來自中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院的研究人員提出人類尿液中的腎上皮細胞是誘導(dǎo)多能干細胞(iPSCs)的理想來源之一。這一方法相比其他方法更簡單,重現(xiàn)性好,所產(chǎn)生的誘導(dǎo)多能干細胞表現(xiàn)出很好的分化能力。在11月8日發(fā)表于《自然實驗手冊》(Nature Protocols)的論文中,研究人員詳細描述了這一實驗技術(shù)方案。
這項研究由廣州生物醫(yī)藥與健康研究院Miguel A. Esteban研究組和裴端卿研究組合作完成, Miguel A. Esteban博士早年畢業(yè)于西班牙納瓦拉大學(xué),2007年加入廣州生物醫(yī)藥與健康研究院,主要從事腫瘤干細胞研究。
2007年,美國和日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn),應(yīng)用人和鼠的正常皮膚細胞,導(dǎo)入KLF4、OCT4、SOX2和C-MYC四種基因,即可由正常體細胞轉(zhuǎn)化成多能干細胞。這一技術(shù)打破了過去只能從人胚胎中獲得多能干細胞的瓶頸。近年來,除了皮膚細胞,研究人員還將許多其他的人體組織細胞誘導(dǎo)成為了多能干細胞比如角質(zhì)細胞、神經(jīng)干細胞、羊水細胞、血液細胞等等。
但不同的組織來源iPSCs生成效率存在著極大的差異,且大多數(shù)情況下獲得的供體細胞采用的是一種侵入性程序,細胞分離工作繁重復(fù)雜。對于某些皮膚病或者血友病、艾滋病等血液疾病患者,未必能從他們的皮膚成纖維細胞或者血液細胞中提取出誘導(dǎo)干細胞,因為他們的這些細胞可能是不健康。
為了減輕患者不必要的痛苦,研究人員提出了分離尿細胞誘導(dǎo)生成iPSCs的方法。研究人員首先對57名個體進行了尿液樣本收集,從42名個體處成功獲得原代細胞培養(yǎng)物。之后,研究人員在分別進行了二、三及第四次嘗試,總體成功率達到近82%。隨后,采用10%的胎牛血清培養(yǎng)基將原始細胞進行培養(yǎng)促使其貼壁及存活。利用腎上皮細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)進行細胞擴增。細胞培養(yǎng)2-3周后,即可用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染方法將外源因子導(dǎo)入尿細胞中,重編程過程需3-4周,出現(xiàn)培養(yǎng)干細胞樣的克隆,再將這些克隆跳出來繼續(xù)培養(yǎng),最終可獲得穩(wěn)定的誘導(dǎo)多能干細胞。
研究人員表示由于分離尿液細胞非常的簡單,30ml尿液便已足夠,這一方法有利于大多數(shù)情況,符合成本效益,通用,適合于應(yīng)用各個年齡、性別和種族。此外,整個的程序相當(dāng)快速,iPSC克隆產(chǎn)率普遍較高可達4%。尿iPSCs (UiPSCs)也顯示出極好的分化潛能,因此代表了生成來自正常個體或遺傳病患者多能細胞的一個極好的選擇。