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Nature methods:原位RNA成像技術(一)

日期:2012-08-02 08:28:24

觀測RNA可為研究人員帶來許多新的認識。存在于特殊細胞以及這些細胞特殊位點中的RNA可以揭示潛藏在差別背后的機制。在癌癥和其他疾病中,RNA轉錄物有時會被發現存在于錯誤的地方。“這就是為什么大家會對RNA的定位感興趣的原因,然而RNA成像一直是一個挑戰,”威爾康乃爾醫學院從事RNA調控研究的Samie Jaffrey說。

 

在過去的12個月里,RNA顯像能力解答了關于流感病毒如果包裝其基因這一長達半世紀之久的爭辯,幫助揭示了H1N1 RNA是如何深入穿透肺組織的,揭露了令人驚訝的剪接動態,證實了RNA轉錄物上的啟動子調節了轉錄物的穩定性,證明了神經元mRNA借助單個的顆粒運輸到了樹突中。Jaffrey說成像對于其他方式很難研究的調控性RNAs尤其重要,“了解非編碼RNA的定位有可能幫助我們了解它們的功能。”

 

生物化學、成像和標記的進步正在不斷擴展研究人員能夠在單個細胞中觀測RNA的途徑。可靠、方便的試劑現在可在市場上購買到,用于在各種情況下標記固定細胞中的RNA。在活細胞中研究RNA轉錄物的技術更具挑戰性,但它們也在不斷擴展和改良。

 

RNA FISH在固定細胞中發現單分子

 

原位雜交(FISH)是通過利用附著熒光染料或其他標記物的互補寡核苷酸組成的轉錄物特異性探針來揭示RNA。首次報道RNA熒光原位雜交是在上世紀80年代,其操作困難且應用有限。然而這一曾經了不起的藝術現在已經成為了一種方便的技術。

 

如果某些商家的希望被實現,在細胞內成像RNA轉錄物將成為像蛋白質免疫染色一樣的常規的技術。臨床診斷公司Advanced Cell Diagnostics的首席執行官Yuling Luo說在基于抗體的蛋白質標記存在問題的地方RNA標記有可能實現。他解釋說因為有可能無法獲得適合的抗體,蛋白質的結構或定位有可能阻礙標記或是標記一種蛋白的條件或許不適于標記另一種。相反,完全不同蛋白質的RNA轉錄物都可以在相同的分析條件下進行檢測。Luo和其他人希望將RNA轉錄物作為生物標記的應用將不斷增多。

 

RNA成像也可以解答基因表達譜研究提出的一些問題。曾經科學家們追蹤過一些轉錄物開展進一步的研究。RNA原位雜交可以顯示基因如何在整個細胞群中表達,在同一個細胞中哪一對轉錄物一起增高和下降,一種轉錄物是否定位在特異的細胞類型中或是像樹突這樣的特殊區室內。原位雜交還可以證實RNA干擾研究中一種轉錄物是否確實受到了抑制。

 

麻省理工學院和Hubrecht 研究所系統生物學家Alexander van Oudenaarden RNA FISH研究的一個巨大推動力就是越來越多的人對細胞所包含的驚人的異質性感興趣。“如果你忽視細胞的個體性,在一根試管中將它們混合到一起,你最終獲得的將是實際上不存在的平均個體。”他提供了一個可口的比喻:只是品嘗水果冰沙沒有人能夠學會區分芒果、香蕉或草莓不同的口味。相鄰的細胞可能剛好不同,檢測它們需要分辨單細胞基因表達。

 


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