基因表達分析新技術(三)
日期:2011-11-14 09:03:42
科學家們為了能深入了解特異性基因表達,發展了許多實驗技術,比如芯片技術,PCR,高通量測序等,但是要想得到精確的結果,仍然依賴于實驗操作人員對于技術掌握的熟練程度。而且隨著基因表達研究越來越多,為了確保公布的結果的精確性,對于相關分析也越來越嚴格。不過所幸目前也有了更多基因表達分析相關的產品,這些產品帶來的新技術也許能幫助我們解決難題。
計數表達
“過去所有用于分析基因表達的方法都是相對間接的方法——通過轉錄標記,和芯片雜交檢測表達水平”,來自Illumina國內公司的資深科學家Gary Schroth說,“目前發展趨勢很清楚,世界正朝著測序,或者說是計數分析發展”,RNA測序也更多的計數分析,直接分析生物樣品中的分子特征。
2007年1月,Schroth研究組研發了一種稱為RNA-seq的實驗方法,這種方法能完成cDNA全長的測序。在短短幾年間,這種技術已經應用于多篇發表文章中,正如Schroth自己所說的,“現在,有超過300份同行評審發表文章采用了RNA-seq方法”,他也提及了增長的高通量——從2007年的每次完成4000-6000萬發展到了今天Illumina HiSeq 2000系統的3億。讀長也翻了三倍,而且如今研究采用的也大多是雙末端測序方法。
同時一些上市的試劑盒也促進了RNA測序的發展,比如Illumina2010年底推出的TruSeq RNA Sample Prep Kits,這一試劑盒能從總RNA生成文庫,并與Illumina測序產量兼容。與之前的方法相比,預混液試劑排除了大部分移液步驟,并減少了純化次數,讓手工操作時間降至最低。全新的自動化友好的流程形式能夠平行處理最多96個樣品。通過目前新一代測序平臺上最易用的樣品制備流程,這實現了經濟、高通量的RNA測序研究。
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