本要點(diǎn)適用于供治療的體內(nèi)診斷用的利用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆、抗體，適用于在人體內(nèi)應(yīng)用的利用重復(fù)DNA技術(shù)制備的基因工程抗體

一、雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體

（一）雜交瘤細(xì)胞

1、親本細(xì)胞

（1）骨髓瘤細(xì)胞

SP2/0或其他適宜的骨髓瘤細(xì)胞系。應(yīng)為不合成或不分泌免疫球蛋白鏈型，具有符合骨髓瘤細(xì)胞的染色體特征，并有明確的來源歷史及符合要求的保存條件。

（2）免疫親代細(xì)胞

經(jīng)抗原免疫的鼠脾B淋巴細(xì)胞或外周血B淋巴細(xì)胞。

應(yīng)有明確的免疫原來源、性質(zhì)及動(dòng)物種系，免疫原詳細(xì)的制備過程。

適宜的免疫方案及免疫淋巴細(xì)胞制備的方法。

2、細(xì)胞融合與克隆化

采用適宜的方法進(jìn)行融合、篩選及克隆化。

3、雜交瘤細(xì)胞檢定

（1）抗體分泌穩(wěn)定性

連續(xù)克隆化后抗體陽性率達(dá)100%，經(jīng)體外連續(xù)傳代3個(gè)月以上和反復(fù)凍存、復(fù)蘇，細(xì)胞系能保持穩(wěn)定分泌特異性抗體。

（2）細(xì)胞核學(xué)特征

檢查細(xì)胞分裂中期染色體，應(yīng)符合雜交瘤細(xì)胞特征。

4、鼠源病毒檢查

按附錄要求檢測(cè)鼠源病毒。

5、支原體檢查

按現(xiàn)行《中國藥典》生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。

6、無菌試驗(yàn)

按現(xiàn)行《中國藥典》生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。

（二）單克隆抗體的檢定

1、免疫球蛋白類及亞類

用免疫雙擴(kuò)散法或其他適宜的方法測(cè)定。

2、親和力

用可靠、準(zhǔn)確的方法測(cè)定單克隆抗體（以下簡(jiǎn)稱為單抗）的親和常數(shù)或相對(duì)親和力。一般情況下，對(duì)于免疫原為可溶性的單抗，測(cè)其親和常數(shù)，對(duì)于免疫原為顆粒性抗原的單抗，測(cè)其相對(duì)親和力。

3、特異性

測(cè)定單抗對(duì)靶抗原的特異性；對(duì)多株單抗識(shí)別的抗原決定簇進(jìn)行相關(guān)性分析。

4、交叉反應(yīng)

按附錄要求。

免疫組織化學(xué)法測(cè)定單抗與人體組織交叉反應(yīng)，用冰凍及石蠟包埋的各種正常臟器組織測(cè)定。來源于腫瘤相關(guān)抗原的單抗應(yīng)進(jìn)行與各種腫瘤組織的交叉反應(yīng)試驗(yàn)。

5、效價(jià)測(cè)定

用適宜方法測(cè)定。

（三）其他原材料

1、細(xì)胞培養(yǎng)用小牛血清

支原體檢測(cè)應(yīng)為陰性。經(jīng)小量試驗(yàn)適于雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。

2、培養(yǎng)液

應(yīng)有培養(yǎng)液來源，質(zhì)量指標(biāo)。

3、化學(xué)試劑

規(guī)格應(yīng)達(dá)到分析純以上。

二、基因工程抗體

參考《人用重組DNA制品質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》和本指導(dǎo)原則中的有關(guān)要求進(jìn)行。

三、細(xì)胞庫的建立

應(yīng)分別建立原始細(xì)胞庫、主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫的三級(jí)管理細(xì)胞庫，一般情況下主細(xì)胞庫來自原始細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫來自主細(xì)胞庫。各級(jí)細(xì)胞庫應(yīng)有詳細(xì)的制備過程、檢定情況及管理規(guī)定等。

四、單抗生產(chǎn)

包括用小鼠腹水法和細(xì)胞培養(yǎng)法制備。

（一）小鼠腹水法

1、小鼠

制備腹水必需使用合格的SPF級(jí)BACB/C小鼠或BACB/C和瑞士小鼠雜交子一代。

2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施應(yīng)有相關(guān)部門頒發(fā)的二級(jí)以上合格證。

3、腹水制備

取適量擴(kuò)增培養(yǎng)的雜交瘤細(xì)胞注射小鼠腹腔制備腹水，小鼠可以預(yù)先用液體石蠟或降植烷等處理。

（二）細(xì)胞培養(yǎng)法

可以采用發(fā)酵罐培養(yǎng)，亦可用細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)收集上清液制備單克隆抗體。培養(yǎng)基用無牛血清或低牛血清培養(yǎng)基，不能用-內(nèi)酰胺類抗生素。

（三）抗體純化

可采用鹽析法、分子篩層析、離子交換親和層析等適宜的方法。

1、盡可能選用一些不引起免疫球蛋白聚合、變性等的純化方法及條件。

2、應(yīng)驗(yàn)證所用的純化方法能去除可能存在的非目標(biāo)產(chǎn)物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、用于生產(chǎn)腹水抗體的刺激物、內(nèi)毒素、其它熱原質(zhì)、培養(yǎng)液成分或?qū)游鲋龀龀煞值取?/SPAN>

3、應(yīng)驗(yàn)證所用的純化方法能有效的去除/滅活病毒。

4、連續(xù)產(chǎn)生的各批產(chǎn)品必須符合質(zhì)檢要求，批間具有良好的重復(fù)性。

5、純化后處理

必要時(shí)對(duì)純化后抗體采用適宜方法進(jìn)行處理。

（四）半成品、成品制備

五、檢定

包括原液（小鼠腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、純化抗體）、半成品及成品的檢定等。

（一）物理化學(xué)檢測(cè)

1、外觀

液體制劑應(yīng)為接近無色微帶乳光的澄清液體，不應(yīng)含有異物、渾濁或搖不散的沉淀。

2、pH值

電位法測(cè)定

3、蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

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