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RNAi技術先驅《Cell》獲技術突破

日期:2011-05-10 08:29:18

來自美國冷泉港實驗室沃森生物科學學院,霍德華休斯醫學院等處的研究人員建立了一種可獲得發夾RNA轉基因小鼠模型的快速可擴展系統,從而解決了RNA干擾的轉基因小鼠模型可重復性低的問題。這一研究成果公布在Cell雜志上。

領導這一研究的是冷泉港實驗室沃森生物科學學院教授Scott W. Lowe,Lowe教授是RNAi小鼠模型研究方面的領先科學家,文章的另外一位作者:冷泉港實驗室Gregory J. Hannon教授則是小RNA研究領域的先驅,曾主編了冷泉港實驗室技術手冊:《MicroRNA研究方法》等。

RNA干擾是目前生命科學領域中的前沿技術,從發現至今,科學家們不僅將基因功能研究的希望寄托在這種能阻斷基因表達的技術上,而且還都將治愈疑難疾病的希望也付之于其上,但是隨著研究的深入,科學家們也發現要在實際操作中進行基因沉默也不是一件容易的事,尤其是在一些實驗中,無法實現RNA干擾轉基因小鼠的重復形成。

在這篇文章中,研究人員將熒光耦合miR30為基礎的shRNAs進行優化,并結合高效胚胎干細胞靶向,建立了一種可獲得發夾RNA轉基因小鼠模型的快速可擴展系統。研究人員利用這一系統,完成了8種tet-調節的發夾RNA轉基因系,包括靶向Firefl和Renilla熒光素酶,Oct4,腫瘤抑制基因p53,p16INK4a, p19ARF,APC,以及已證明為高效敲除的GFP沉默,這些在體內組織中都呈現廣泛性敲除。

研究人員還通過靶向APC的shRNAs敲除,發現了這一系統如何識別出預測的表型,以及已充分研究的基因的功能。而且通過基因沉默調控,研究人員還驗證了APC/Wnt,和p19ARF作為T細胞急性淋巴細胞白血病/淋巴瘤和肺腺癌潛在治療靶標的作用。這些實驗數據都說明這一系統是一個可獲得任何哺乳動物基因RNAi轉基因小鼠得到低成本,可擴展平臺。

Lowe教授和Hannon教授在此之前還發表了一篇RNAi技術的重要文章:他們發現了一種能幫助研究人員一次篩選上千候選發夾RNA分子,從中找到能沉默目標基因的RNA分子的新方法。


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