在线日韩日本国产亚洲丨少妇伦子伦情品无吗丨欧美性猛交xxxx免费看蜜桃丨精品人妻系列无码一区二区三区丨亚洲精品无码不卡在线播放

Your Good Partner in Biology Research

染色體步移技術的改進

日期:2010-04-26 16:57:35

染色體步移(genome walking)是一種克隆方法,可以獲得與已知序列相鄰的未知基因組區域。在過去20年研究人員開發出多種染色體步移的方法,大體可分為三類:反向PCR,連接介導的PCR和隨機引物PCR。最近,韓國生物科學技術研究所(KRIBB)的一個研究小組對傳統的連接介導PCR方法進行了改進,文章發表在近期的《Analytical Biochemistry》上。

KRIBB的首席科學家宋正勛(Jung-Hoon Sohn)認為染色體步移是一種很有效的基因克隆方法。“一旦你得到部分的基因組片段,你就能通過PCR不斷獲得側翼片段。如果不使用PCR,從DNA文庫中克隆不但單調,而且困難。”

然而基于PCR的染色體步移方法面臨著多種問題:特異性和效率低,步移距離短,且方法復雜。宋博士解釋道,盡管PCR一般需要兩個起始位點,而連接介導的PCR染色體步移只需要單個起始位點。通過與缺乏5’端磷酸基團的框(cassette)連接,產生了第二個起始位點。這種方法的問題在于往往非特異擴增了許多DNA片段。宋博士及其同事開發的“模板鎖定(template-blocking)”方法降低了這種非特異的擴增。

在這種新方法中,研究人員用雙脫氧NTP(ddNTP)填補了限制性酶消化的基因組片段的3’-OH,并與正確設計的框連接。這樣,側翼伴有框的基因組DNA片段就作為靶基因擴增的模板,擴增引物分別為基因特異的引物和框引物。基因組DNA的末端被ddNTP鎖定,從而大大降低了非特異性擴增,并產生了簡單快速的染色體步移。宋博士稱:“模板鎖定的PCR顯示出高特異性。它既不需要特殊設計的引物,也不需要巢式PCR。”

研究人員通過克隆畢赤酵母的一個PGK1新啟動子和青霉菌的兩個纖維素酶新基因,來檢驗了這種模板鎖定PCR。這兩種生物的完整基因組序列目前都還沒有。

宋博士解釋道:“真菌纖維素酶對于降解纖維素生物質產生糖和生物能量非常重要。我們從腐爛的木頭中分離出這種真菌,用于新纖維素酶的克隆。它只是模板鎖定PCR的一個例子,說明在未知基因組信息的情況下,從微生物中克隆基因也很簡單。”

對于基因組測序已經完成的少數物種(如人、小鼠、線蟲、水稻、擬南芥等)來說,可以輕松地從數據庫中找到已知序列的側翼序列。但是,對于大多數生物而言,在不了解它們的基因組序列以前,想要知道一個已知區域兩側的DNA序列,只能采用染色體步移技術。

盡管全基因組測序技術正在迅猛發展,獲得多個物種的全基因組序列變得更加容易,但宋認為染色體步移的改善對于實驗室日常工作仍很關鍵,因為很多種感興趣的生物都未完成基因組測序,或只完成了部分。


主站蜘蛛池模板: 成人做爰视频www网站小优视频| 亚洲人成中文字幕在线观看 | 国产乱子伦一区二区三区| 成年午夜性影院免费观看| 性欧美丰满熟妇xxxx性5| 国产成人啪精品视频网站午夜 | 麻豆精产一二三产区| 国产成人精品精品日本亚洲| 国产精品视频一区二区三区不卡 | 国产精品偷伦视频免费观看了| 天堂va蜜桃一区二区三区| 亚洲中文字幕在线第二页| 护士av无码在线观看| 亚洲 a v无 码免 费 成 人 a v| 伊人久久大香线蕉av一区二区| 麻豆蜜桃av蜜臀av色欲av| 中文字字幕在线精品乱码| www插插插无码免费视频网站 | 日本少妇寂寞少妇aaa| 国产成人精品三级麻豆| 天堂在/线资源中文在线| 西西人体大胆无码视频| 人妻无码精品久久亚瑟影视| 99视频偷窥在线精品国自产拍| 国产区精品系列在线观看| 97无码免费人妻超级碰碰碰碰| 国精产品一品二品国精在线观看| av片在线观看免费| 女同免费毛片在线播放| 成人无码亚洲精品无码| 国产av一区最新精品| 亚洲色在线v中文字幕| 免费无码又爽又刺激毛片| 国产偷国产偷亚洲高清日韩| 午夜高清在线无码| 韩国精品久久久久久无码| 成人亚洲性情网站www在线观看| 蜜臀av一区二区| 精品国内自产拍在线观看| 国产伦久视频免费观看视频| 国产美女被遭强高潮免费网站|