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檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞中miRNA的新技術(shù)

日期:2015-04-01 09:20:39

 越來(lái)越多的證據(jù)表明,循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTC)中的microRNA具有診斷和預(yù)后的潛力。然而,檢測(cè)卻并非易事。近日,西班牙的研究人員在《Science Reports》上介紹了一種方法,能利用原位雜交檢測(cè)這種小的非編碼RNA

 

CTC是從原發(fā)性腫瘤脫落,然后進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)的一種細(xì)胞。它們到達(dá)其他的組織或器官,導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移。鑒于近年來(lái)CTC檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步,研究人員能夠利用這些上皮細(xì)胞來(lái)監(jiān)測(cè)癌癥進(jìn)展,并跟蹤患者對(duì)治療的反應(yīng)。

 

盡管如此,大多數(shù)CTC分析的靈敏度較低。據(jù)GENYO研究團(tuán)隊(duì)介紹,這主要是因?yàn)橹挥猩倭康纳掀?biāo)志物可用來(lái)鑒定和分離全血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞,通常是上皮細(xì)胞粘附分子(EpCAM)和細(xì)胞角蛋白(CK)。然而,這些上皮細(xì)胞也可能來(lái)自其他上皮組織,而并非腫瘤。

 

讓事情更加復(fù)雜的是,最新數(shù)據(jù)表明存在一部分CTC,不表達(dá)EpCAMCK。相反,這些細(xì)胞表現(xiàn)出上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的特征。這個(gè)過(guò)程與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān),其中上皮細(xì)胞呈現(xiàn)出間質(zhì)特征,促進(jìn)遷移、入侵和抗凋亡。

 

基于這些原因,探索CTCmiRNA的生物標(biāo)志物潛力受到了限制。為了解決這個(gè)問(wèn)題,GENYO的研究人員開(kāi)發(fā)出一種稱(chēng)為MishCTC的方法,將原位雜交方法以及基于CK表達(dá)的免疫磁性選擇和免疫細(xì)胞化學(xué)相結(jié)合,利用鎖核酸(LNA)探針來(lái)檢測(cè)miRNA

 

為了驗(yàn)證這種技術(shù),研究人員選擇了miR-21,這種miRNA靶定多個(gè)腫瘤抑制基因,而且在癌細(xì)胞中表達(dá)而不在造血細(xì)胞中表達(dá),因此是檢測(cè)CTC的理想標(biāo)志物。

 

他們獲得了25例轉(zhuǎn)移性癌癥患者的外周血樣本,并利用MishCTC方法開(kāi)展了分析。在這25個(gè)樣本中,11個(gè)樣本含有表達(dá)CKmiR-21CTC。對(duì)于CK表達(dá)丟失的EMT誘導(dǎo)的上皮腫瘤細(xì)胞系(MCF-7),MishCTC技術(shù)也成功追蹤了miR-21的表達(dá),表明miR-21可能是檢測(cè)EMT表型的CTC的一個(gè)很好的標(biāo)志物。

 

據(jù)作者介紹,這些數(shù)據(jù)第一次證明了原位雜交方法可以用于CTCmiRNA的鑒定。他們目前正在招募大批的癌癥患者,以便根據(jù)miRNA的表達(dá)來(lái)研究CTC的異質(zhì)性。

 


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