在线日韩日本国产亚洲丨少妇伦子伦情品无吗丨欧美性猛交xxxx免费看蜜桃丨精品人妻系列无码一区二区三区丨亚洲精品无码不卡在线播放

Your Good Partner in Biology Research

Nanodiscs在膜蛋白中的應用

日期:2018-02-01 13:42:11

在上一期中,我們簡單介紹了去垢劑的基本性質及其在膜蛋白中的應用。在含有去垢劑的緩沖中,大部分膜蛋白可以維持穩定性和活性。但少數對去垢劑敏感的膜蛋白是不適宜含有去垢劑的緩沖條件的,具體表現為無法純化(例如純化出的膜蛋白十分雜且得率非常低),穩定性不好(易于降解或有明顯沉淀)和沒有活性(可能該膜蛋白對去垢劑敏感,或其活性需要磷脂雙分子層的結構)。針對這類膜蛋白,我們建議嘗試nanodiscs技術。目前,Nanodiscs技術在膜蛋白的分離、純化、結構研究和功能表征方面展現了重要的優勢。本文介紹nanodiscs的成分和結構,nanodiscsliposomes的對比以及nanodiscs在膜蛋白中的應用。希望通過我們的介紹,可以幫助您進一步了解膜蛋白。

查看水通道相關蛋白和抗體

1.Nanodiscs的成分和結構

Nanodiscs的主要成分是合成磷脂和兩親性螺旋蛋白(amphipathic helical protein),也叫做膜支架蛋白(membrane scaffold proteinMSP)。膜支架蛋白與血清載脂蛋白相關,而血清載脂蛋白是高密度脂蛋白的主要成分。2個膜支架蛋白為帶狀,環繞著磷脂,如下圖Fig 1[1],即盤狀磷脂雙分子層Nanodiscs

2. 模型膜

我們主要對比liposomesnanodiscs兩種模型膜。

2.1 Liposomes

Liposomes是兩親性脂雙層的囊泡。制備liposomes有許多方法,其中最有名最不要求設備的方法是Bangham[2]。將目的脂質溶解于揮發性有機溶劑中,在惰性氣流下干燥。用水溶性緩沖渦旋所得的薄層脂質,然后通過各種方法,例如超聲、均質化和用尺寸已知的過濾器擠出(一般為100-200nm孔徑尺寸),最后轉化為單層囊泡。這也導致了liposomes非常明顯的劣勢,不穩定、不均質、難以復制等。

Liposomes易于聚集和融合,通常在長時間或在某些物理操作下是不穩定的,例如停止流動或劇烈混合。通過擠出機制備的liposomes尺寸并不是均質的,不同批次制備可能存在明顯差異[3]。組裝入liposomes中的膜蛋白通常會導致樣品渾濁和粘稠,這可能會限制一些生物化學分析技術的應用。

2.2 Nanodiscs

制備nanodiscs首先要準備包含磷脂、膜支架蛋白和去垢劑的混合物,一旦除去去垢劑,剩余的成分即組裝為直徑為8-16nm的盤狀磷脂雙分子層,即nanodiscs[4]Nanodiscs的直徑由MSP帶的長度決定,當磷脂與MSP處于最佳摩爾比時,即形成均勻的nanodiscs

對比liposomesNanodiscs的尺寸分布更加均質(在一次制備中)和一致(在不同批次的制備中);nanodiscs有更加精準的顆粒尺寸大小,可以通過調節MSP的序列長度來調節大小;nanodiscs更加穩定。

3.Nanodiscs在膜蛋白中的應用

關于Nanodiscs的應用,已經有非常優秀的綜述[5],關于結構的研究可具體見下表,可應用于結構生物學,適用于電子顯微鏡、NMREPR和光譜檢測技術等各種技術。

Table 1. Methods and tools used with MPs incorporated into nanodiscs

\

4.利用大腸無細胞蛋白表達和nanodiscs技術表達AQPs

Cusabio結合大腸無細胞蛋白表達和nanodiscs技術,在大腸無細胞蛋白表達體系中加入預組裝的nanodiscs。膜蛋白邊翻譯邊組裝入nanodiscs里,形成膜蛋白-nanodiscs復合物(Fig 2.)。這種模擬的人造脂質環境為分析不同的脂質對膜蛋白的影響提供了新的途經,讓我們更好的理解膜蛋白。下圖Fig 3.Escherichia coli Aquaporin Z(aqpZ)成功組裝入nanodiscs后,SDS-PAGE的檢測結果。由圖可見有2條帶,一條為MSP,一條為目的膜蛋白aqpZ

下圖Fig 3.Escherichia coli Aquaporin Z(aqpZ)成功組裝入nanodiscs后,SDS-PAGE的檢測結果。由圖可見有2條帶,一條為MSP,一條為目的膜蛋白aqpZ

 

Fig 2. Schematic illustration of a MSP nanodiscs with a 7-transmembrane protein embedded.Diameter is about 10.6 nm. Picture from Sligar.

\

Fig 3.

Cusabio表達膜蛋白新方案

     提供無風險膜蛋白表達服務(去垢劑方案)和300aa以下的無風險組裝入nanodics服務。歡迎咨詢!

查看水通道相關蛋白和抗體

往期回顧:

Detergent的性質及其在膜蛋白中的應用

Refenrences

[1] Applications of Phospholipid Bilayer Nanodiscs in the Study of Membranes and Membrane Proteins. Abhinav Nath, William M. Atkins, and Stephen G. Sligar. Biochemistry, 2007, 46 (8), 2059-2069

[2] Large volume liposomes by an ether vaporization method. D Deamer, AD Bangham. Biochimica et Biophysica Acta, 443 (1976) 629-~34

[3] Applications of Phospholipid Bilayer Nanodiscs in the Study of Membranes and Membrane Proteins. Abhinav Nath, William M. Atkins, and Stephen G. Sligar. Biochemistry, 2007, 46 (8), 2059-2069

[4] Self-assembly of discoidal phospholipid bilayer nanoparticles with membrane scaffold proteins. Timothy H. Bayburt,Yelena V. Grinkova, and Stephen G. Sligar. Nano Letters, 2002, 2 (8), pp 853–856

[5]Nanodiscs for structural and functional studies of membrane proteins.Ilia G Denisov & Stephen G Sligar.Nature Structural & Molecular Biology 23, 481486 (2016)


主站蜘蛛池模板: 国产久热精品无码激情| 国产午夜精品久久精品电影| 国产精品日本一区二区在线播放 | 白嫩少妇激情无码| 精品国产三级a∨在线| 极品少妇xxxx| 波多野结衣久久一区二区| 在线观看一区二区三区国产免费| 国产午夜精华无码网站| 色偷偷偷久久伊人大杳蕉| 午夜嘿嘿嘿影院| 国内a∨免费播放| 和岳每晚弄的高潮嗷嗷叫视频| 久久精品2021国产| 中文字幕+乱码+中文乱码www| 人成午夜大片免费视频| 日韩欧美在线综合网另类| 高级会所人妻互换94部分| 在线 | 一区二区三区| 欧洲无码精品a码无人区| 欧美丰满大爆乳波霸奶水多| 无码人妻丰满熟妇a片护士| 极品白嫩的小少妇| 成人欧美一区二区三区在线| 中文字幕丰满伦子无码| 精产国品一二三产品麻豆| www婷婷av久久久影片| 日本熟妇大屁股人妻| 国产熟妇勾子乱视频| 久久久久久成人综合网| 欧美黑人激情性久久| 97久久精品人人做人人爽| 粉嫩少妇内射浓精videos| 国产精品久久久久久麻豆一区| 男人天堂2018亚洲男人天堂| 青草国产精品久久久久久| 午夜不卡av免费| 国产午夜伦鲁鲁| 亚洲制服有码在线丝袜| 亚洲国产成人精品无码区在线| 亚洲日韩中文字幕无码一区|