血清樣本與血漿樣本在ELISA試劑盒檢測中的選擇差異？
日期：2025-06-24 16:18:17
在ELISA試劑盒檢測中，血清樣本與血漿樣本的選擇差異主要源于兩者的成分組成、制備方法及理化性質的不同。這些差異會直接影響檢測的準確性、特異性及實驗操作的便利性。以下從多個維度詳細解析兩者的選擇要點及應用場景：
2. 干擾案例
一、樣本制備與成分差異
1. 制備流程對比
| 項目 | 血清樣本 | 血漿樣本 |
| 采集方式 | 靜脈采血后，室溫靜置30-60分鐘使血液凝固，再離心（3000rpm，10分鐘）獲取上清液。 | 采血時加入抗凝劑，立即顛倒混勻，離心（3000rpm，10分鐘）獲取上清液。 |
| 關鍵步驟 | 等待凝血過程，可能產生纖維蛋白凝塊，需過濾或二次離心。 | 抗凝劑選擇需與檢測項目匹配，避免抗凝劑干擾。 |
| 處理時間 | 凝固+離心約1-2小時，耗時較長。 | 抗凝后可立即離心，處理時間短（約30分鐘）。 |
2. 成分差異對檢測的影響
（1）血清：
不含纖維蛋白原，但含有凝血因子降解產物（如D-二聚體）、抗體、細胞因子、激素等。
優點：成分更接近生理狀態，適用于檢測與凝血無關的指標（如抗體、多數細胞因子）。
缺點：凝血過程中可能釋放細胞內物質（如乳酸脫氫酶），導致溶血風險；纖維蛋白凝塊可能堵塞加樣針或干擾反應。
（2）血漿：
含纖維蛋白原及抗凝劑（如肝素、EDTA、檸檬酸鈉），不含凝血因子 Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ等（因未激活凝血過程）。
優點：抗凝劑可抑制凝血，適合檢測易降解的分子（如某些激素、神經遞質），且處理快速，適合急診檢測。
缺點：抗凝劑可能與檢測體系中的抗體或抗原結合，導致假陽性或假陰性（如肝素帶負電荷，可與帶正電荷的蛋白結合）。
二、抗凝劑對 ELISA 檢測的干擾機制
1. 常見抗凝劑的影響
| 抗凝劑類型 | 作用機制 | 對ELISA的干擾 | 適用檢測項目 |
| 肝素 | 抑制凝血酶和因子Xa | 與帶正電荷的蛋白（如抗體、抗原）結合，導致非特異性吸附，增加背景信號；可能激活補體系統，干擾免疫反應。 | 不適合檢測抗體、細胞因子；適合檢測與肝素無關的指標（如病毒核酸）。 |
| EDTA | 螯合Ca²?，抑制凝血酶激活 | 可能螯合檢測體系中的Ca²?依賴性蛋白（如某些酶標抗體），影響酶活性；對依賴Ca²?的抗原 - 抗體結合有抑制作用。 | 適合檢測不依賴Ca²?的指標（如多數細胞因子、病毒抗體）。 |
| 檸檬酸鈉 | 螯合Ca²?，抑制凝血酶生成 | 對pH影響較小，但高濃度可能稀釋樣本，降低檢測靈敏度；可能與某些抗體的Fc段結合，導致假陽性。 | 適合檢測凝血因子、補體成分等；不適合檢測需中性pH環境的指標。 |
2. 干擾案例
肝素干擾實例：在檢測IL-6時，肝素可與IL-6的受體結合，導致ELISA結果偏低；在檢測抗磷脂抗體時，肝素可能與抗體競爭結合位點，導致假陰性。
EDTA干擾實例：在檢測Ca²?依賴性蛋白（如組織因子）時，EDTA會螯合 Ca²?，使蛋白失活，導致結果偏低。
三、檢測項目與樣本類型的匹配原則
1. 優先選擇血清的檢測場景
抗體檢測：如病原體抗體（HIV、HBsAb）、自身抗體（ANA、抗dsDNA抗體）等，血清中抗體濃度穩定，且凝血過程不影響抗體活性。
細胞因子與炎癥因子：如TNF-α、IL-1β等，血清中這些因子的含量與生理狀態一致性高，且不受抗凝劑干擾。
激素檢測：如甲狀腺激素（T3、T4）、性激素等，血清中的激素結合蛋白（如甲狀腺素結合球蛋白）含量穩定，適合定量分析。
腫瘤標志物：如 CEA、AFP 等，血清樣本的檢測標準化程度高，臨床參考范圍更明確。
2. 優先選擇血漿的檢測場景
易降解分子檢測：如兒茶酚胺（腎上腺素、去甲腎上腺素）、前列腺素等，血漿抗凝處理可快速終止代謝，保持分子穩定性。
凝血相關因子：如凝血因子Ⅷ、Ⅸ，血漿未激活凝血過程，可準確反映因子含量；而血清因凝血過程消耗因子，不適用。
急診或快速檢測：血漿處理時間短，適合需要立即出結果的場景（如急診感染標志物檢測）。
特定抗凝劑匹配的檢測：如使用檸檬酸鈉抗凝的血漿適合檢測凝血因子，使用EDTA抗凝的血漿適合檢測某些酶類（如乳酸脫氫酶）。
四、樣本處理對檢測結果的影響
1. 溶血、脂血的影響差異
（1）溶血：
血清樣本：凝血過程中紅細胞破裂可能導致溶血，釋放血紅蛋白及細胞內酶（如 LDH），血紅蛋白可與酶標抗體競爭結合位點，導致假陰性；細胞內酶可能干擾底物顯色。
血漿樣本：采血時混勻不當或離心速度過高可能導致溶血，但抗凝劑可減少凝血過程中的紅細胞損傷，溶血風險相對較低。
（2）脂血：
兩者均可能因脂質顆粒干擾光吸收，導致OD值偏高，出現假陽性。但血漿樣本因抗凝處理后可立即離心，若存在脂血可通過高速離心（如4000rpm）或脫脂處理（如正己烷萃取）改善，而血清樣本的脂血處理更困難。
2. 儲存與穩定性
短期儲存（<24小時）：血清和血漿均可4℃保存，但血清需注意避免反復凍融（可能導致蛋白變性）；血漿需注意抗凝劑是否在低溫下析出（如檸檬酸鈉可能結晶）。
長期儲存（>24小時）：均需-20℃或-80℃凍存，血清凍融次數建議≤3 次，血漿因抗凝劑存在，凍融后成分更穩定（如肝素可抑制某些酶的活性）。
五、試劑盒說明書的推薦與實驗驗證
1. 試劑盒設計的樣本類型偏好
多數ELISA試劑盒推薦血清：因血清成分更接近臨床常規檢測樣本，且抗凝劑干擾的可能性低。例如，腫瘤標志物檢測試劑盒通常明確標注 “僅適用于血清樣本”。
特定試劑盒推薦血漿：如凝血因子檢測試劑盒、兒茶酚胺檢測試劑盒，會明確要求使用指定抗凝劑（如檸檬酸鈉）的血漿。
2. 跨樣本類型使用的驗證要求
若需用血漿替代血清（或反之），需進行以下驗證：
平行性試驗：用同一批樣本的血清和血漿分別檢測，比較結果的相關性（如 Pearson相關系數需>0.9）。
回收率試驗：向樣本中添加已知濃度的標準品，檢測回收率（應在80%-120%范圍內）。
干擾試驗：檢測抗凝劑是否對體系產生干擾（如添加肝素到血清樣本中，觀察OD值變化）。
六、臨床與科研中的選擇策略
1. 臨床檢測的優先原則
常規項目：如肝功能、腎功能、腫瘤標志物，優先選血清，因臨床參考區間基于血清建立，且醫院檢驗科血清樣本處理流程更成熟。
急診項目：如降鈣素原（PCT）、C反應蛋白（CRP），優先選血漿，因處理時間短，可快速出結果。
凝血相關項目：如D-二聚體、纖維蛋白原，必須選血漿（檸檬酸鈉抗凝），血清因凝血過程消耗相關因子，結果不準確。
2. 科研實驗的注意事項
機制研究：若檢測目標為細胞分泌因子（如細胞培養上清中的細胞因子），樣本類型需與體內環境一致（如血清模擬體內血液循環狀態）。
縱向研究：需保持樣本類型一致（如所有時間點均用血清或血漿），避免因樣本差異導致結果波動。
多中心研究：需統一樣本類型及抗凝劑種類，減少實驗誤差（如多中心檢測IL-6時，統一使用EDTA抗凝血漿）。
七、樣本選擇的決策流程
明確檢測目標：分析檢測分子的性質（如是否易降解、是否依賴凝血因子）。
查閱試劑盒說明：嚴格遵循試劑盒推薦的樣本類型及抗凝劑要求。
評估抗凝劑干擾：若必須使用血漿，選擇與檢測體系兼容的抗凝劑（如EDTA適用于多數蛋白檢測，肝素僅在特定情況下使用）。
優化樣本處理：血清需避免溶血和凝塊，血漿需確保抗凝劑與血液比例正確（如檸檬酸鈉與血液比例1:9）。
實驗驗證：跨樣本類型使用時，通過平行性、回收率等試驗確認結果可靠性。
通過以上維度的綜合考量，可最大限度減少血清與血漿樣本在ELISA檢測中的選擇偏差，確保結果的準確性與可重復性。
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