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如何分析RNA pulldown實驗的結果?

日期:2025-05-13 10:39:45

    定性分析:通過 Western blot 檢測,可以確定已知蛋白質是否與目標 RNA 相互作用。將洗脫得到的蛋白質樣品進行 SDS - PAGE 電泳,然后轉膜,用特異性抗體進行檢測。如果在相應的分子量位置出現條帶,說明該蛋白質與目標 RNA 有相互作用。
 
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    定量分析:可以通過灰度值分析等方法對 Western blot 結果進行半定量分析,比較不同條件下蛋白質與 RNA 相互作用的強弱。此外,還可以使用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等方法進行定量分析,若采用帶有熒光標記的 RNA 探針,也可通過熒光強度來定量分析 RNA - 蛋白質的相互作用。
    質譜分析:對于篩選未知蛋白質與 RNA 的相互作用,質譜分析是常用的方法。將洗脫得到的蛋白質樣品進行質譜分析,通過數據庫比對,可以鑒定出與目標 RNA 相互作用的蛋白質種類和相對含量。