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elisa洗板的作用是什么?如何正確洗板?

日期:2025-04-11 10:03:00

    洗板的作用是去除未結(jié)合的抗原、抗體和其他雜質(zhì),減少非特異性反應(yīng),提高檢測的特異性和準(zhǔn)確性。洗板時一般使用洗板機,按照試劑盒說明書的要求設(shè)置洗板參數(shù),包括洗滌次數(shù)、洗滌液體積和浸泡時間等。如果沒有洗板機,也可以采用手工洗板的方法,但要注意洗滌充分,避免殘留雜質(zhì)影響結(jié)果。每次洗板后要盡量吸干孔內(nèi)的液體,可以將微孔板倒扣在吸水紙上輕輕拍打,以去除殘留液體。
 
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    ELISA洗板的作用主要是去除未結(jié)合的物質(zhì),包括未反應(yīng)的抗原、抗體、酶標(biāo)物以及其他雜質(zhì),以減少非特異性信號,提高檢測的特異性和準(zhǔn)確性。正確洗板的方法如下:
 
    準(zhǔn)備洗液:根據(jù)試劑盒說明書的要求配制洗液,一般使用含有吐溫 - 20 等表面活性劑的磷酸鹽緩沖液(PBS)。確保洗液的濃度和 pH 值準(zhǔn)確,并且現(xiàn)用現(xiàn)配,以保證洗液的有效性。
 
    加洗液:將適量的洗液加入到酶標(biāo)板的每個孔中。加液量要準(zhǔn)確且均勻,一般每孔加入 200 - 300μL 洗液,以確保孔內(nèi)的液體能夠充分覆蓋反應(yīng)表面。可以使用多通道移液器或洗板機進行加液操作,以提高加液的效率和準(zhǔn)確性。
 
    浸泡與孵育:加入洗液后,讓酶標(biāo)板在室溫下浸泡一段時間,通常為 1 - 5 分鐘。浸泡過程中,洗液中的表面活性劑可以幫助溶解和去除未結(jié)合的物質(zhì)。孵育時間不宜過長,否則可能會導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體復(fù)合物解離。
 
    棄去洗液:浸泡結(jié)束后,將酶標(biāo)板中的洗液徹底棄去。可以將酶標(biāo)板倒扣在吸水紙上,輕輕拍打,使孔內(nèi)的洗液盡可能流盡。也可以使用洗板機的抽吸功能將洗液吸出,但要注意避免吸頭接觸到孔底,以免刮傷孔內(nèi)的包被物或吸附已結(jié)合的物質(zhì)。
 
    重復(fù)洗滌:按照上述步驟,重復(fù)洗滌 3 - 5 次,以確保充分去除未結(jié)合的物質(zhì)。每次洗滌后都要盡量將洗液棄盡,避免殘留的洗液影響下一次的洗滌效果或干擾后續(xù)的檢測。
    最后一次洗滌后處理:最后一次洗滌棄去洗液后,可將酶標(biāo)板在吸水紙上用力拍干,或者使用吹風(fēng)機的冷風(fēng)檔吹干,以去除孔內(nèi)殘留的水分。但要注意避免使用過熱的風(fēng),以免影響酶標(biāo)板上的抗原抗體活性。

    
如果使用洗板機洗板,需要提前根據(jù)酶標(biāo)板的規(guī)格和洗液的用量進行參數(shù)設(shè)置,并在洗板過程中觀察洗板機的運行情況,確保洗板程序正常進行。同時,要定期對洗板機進行維護和校準(zhǔn),保證其加液和吸液的準(zhǔn)確性。此外,手工洗板時要注意操作的規(guī)范性和一致性,以減少實驗誤差。


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