elisa加樣操作有哪些關鍵要點?
日期:2025-04-23 10:01:57
加樣時要使用經過校準的移液器,確保加樣量準確。加樣速度要適中,避免產生氣泡,防止樣本飛濺到孔壁或孔外。對于不同的試劑,要使用不同的移液器吸頭,避免交叉污染。加樣后要輕輕晃動微孔板,使樣本或試劑在孔內均勻分布,但要注意避免液體溢出。


ELISA 加樣操作的關鍵要點包括加樣器具的選擇、加樣的準確性、避免交叉污染、加樣速度和均勻性等方面,以下是詳細介紹:
1.加樣器具的選擇與使用
移液器:根據加樣量選擇合適量程的移液器,如加樣量為 10 - 100μL 可選擇 100μL 量程的移液器,以確保加樣的準確性。使用前需檢查移液器的準確性和密封性,定期進行校準。在加樣時,要垂直握住移液器,將吸頭輕輕插入反應孔底部,緩慢釋放液體,避免產生氣泡。
加樣針:對于一些自動化的 ELISA 儀器,使用加樣針進行加樣。要確保加樣針的清潔和通暢,避免堵塞。加樣針的高度和角度要調整合適,以保證加樣的準確性和重復性。
2.加樣的準確性
體積準確:嚴格按照試劑盒說明書的要求加入適量的樣本、標準品、試劑等。例如,在加入標準品時,要準確吸取不同濃度的標準品溶液,以繪制準確的標準曲線。使用移液器時,要注意正確的操作方法,包括吸液、放液的速度和力度,避免因操作不當導致加樣體積不準確。
濃度準確:如果樣本或試劑需要稀釋后再加入,要確保稀釋的準確性。使用精確的量具和準確的稀釋方法,按照規定的稀釋倍數進行稀釋,以保證加入的物質濃度符合實驗要求。
3.避免交叉污染
更換吸頭:在吸取不同的樣本、標準品或試劑時,必須更換吸頭,不能用同一個吸頭吸取不同的液體,防止交叉污染。即使是吸取同一試劑,如果中間間隔時間較長或接觸了其他物質,也應更換吸頭。
防止液體飛濺:加樣過程中要避免液體飛濺到其他孔或實驗臺上。如果有液體飛濺,應及時用干凈的紙巾擦拭干凈,并對相關區域進行消毒處理,防止污染其他樣本或試劑。
保持實驗臺面清潔:實驗過程中要保持實驗臺面的整潔,避免在臺面上放置過多的試劑和樣本,防止相互污染。加樣完成后,及時清理實驗臺面,將用過的吸頭、離心管等廢棄物放入指定的垃圾桶中。
4.加樣速度和均勻性
控制加樣速度:加樣速度不宜過快,以免產生氣泡或導致液體濺出。尤其是在加入酶標試劑和底物時,過快的加樣速度可能會影響反應的準確性。但加樣速度也不能過慢,否則會導致加樣時間過長,使先加入的樣本或試劑在孔內停留時間不一致,影響實驗結果的重復性。
保證均勻性:在加樣時要盡量保證每個孔的加樣量均勻一致。對于多孔板,可采用多通道移液器或排槍進行加樣,以提高加樣的效率和均勻性。如果使用單通道移液器,要按照一定的順序逐孔加樣,避免遺漏或重復加樣。
此外,加樣完成后,可輕輕晃動微孔板,使液體在孔內充分混合,但要注意避免液體溢出。如果需要進行孵育,要按照試劑盒說明書的要求,將微孔板放入孵育箱中,保持合適的溫度和濕度,以確保反應的順利進行。