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熒光定量pcr試劑盒原理

日期:2023-11-24 14:02:50


    熒光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)試劑盒是一種用于測(cè)定DNA或RNA樣本中特定序列的數(shù)量的試劑盒。其原理如下:
 
?    DNA擴(kuò)增:首先,將待測(cè)樣本中的DNA通過(guò)PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。PCR是一種體外的DNA復(fù)制過(guò)程,利用DNA聚合酶酶作用下的溫度循環(huán),使DNA序列得以快速擴(kuò)增。
 
?    靶標(biāo)序列擴(kuò)增:PCR反應(yīng)中使用引物(primers)選擇性地識(shí)別和結(jié)合目標(biāo)DNA序列的兩個(gè)端部,形成DNA復(fù)制的起始點(diǎn)。在PCR循環(huán)中,引物會(huì)被DNA聚合酶酶作用下延伸,產(chǎn)生兩條新的DNA鏈。
 
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?    熒光探針檢測(cè):在熒光定量PCR中,引物和熒光探針(probe)同時(shí)使用。熒光探針通常由一個(gè)與目標(biāo)序列互補(bǔ)的DNA片段和一個(gè)與熒光染料結(jié)合的短鏈上的熒光基團(tuán)組成。
 
?    信號(hào)累積:當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)行時(shí),DNA聚合酶會(huì)沿著DNA模板鏈進(jìn)行擴(kuò)增,并在到達(dá)熒光探針的位置時(shí),酶會(huì)切開(kāi)熒光探針,釋放熒光染料。因此,隨著PCR的進(jìn)行,熒光信號(hào)會(huì)不斷增加。
 
?    熒光檢測(cè)與定量:熒光信號(hào)可通過(guò)特定的熒光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。檢測(cè)系統(tǒng)會(huì)記錄PCR反應(yīng)過(guò)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度,并通過(guò)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)曲線等方法,將信號(hào)轉(zhuǎn)化為目標(biāo)序列的數(shù)量。
 
?    通過(guò)以上步驟,熒光定量PCR試劑盒可以快速、準(zhǔn)確地測(cè)定樣本中特定DNA或RNA序列的數(shù)量,廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原體檢測(cè)、基因突變分析等領(lǐng)域。

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