人血清elisa實驗的關(guān)鍵步驟
日期:2023-08-07 15:21:57
人血清ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)是一種常用于檢測特定抗原或抗體在人血清中的方法。以下是人血清ELISA實驗的關(guān)鍵步驟:
前處理:將人血清樣本離心,分離血清并轉(zhuǎn)移到新的離心管中。可以使用凝膠管或離心機(jī)進(jìn)行離心。
包被抗原:將待測抗原溶液添加到微孔板的孔中,并在恒溫條件下孵育一段時間,使抗原吸附到孔內(nèi)壁。
阻斷:用一種阻斷劑(例如牛血清蛋白、BSA等)封閉剩余的非特異性結(jié)合位點,防止樣品中的非特異性蛋白質(zhì)與孔壁結(jié)合。
加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本:將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本加入到已包被的孔中,使其與孔內(nèi)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合。
洗滌:通過多次洗滌,去除未結(jié)合的蛋白質(zhì),減少干擾物的存在。
添加檢測抗體:加入與待測抗原或抗體特異結(jié)合的酶標(biāo)記二抗(如HRP標(biāo)記的抗人IgG),并孵育一定時間,使其與結(jié)合在孔中的抗原或抗體結(jié)合。
再次洗滌:洗滌去除未結(jié)合的檢測抗體。
加入底物:加入適當(dāng)?shù)牡孜铮ㄈ鏣MB)反應(yīng),并在暗處孵育一段時間,使其與酶發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生可量化的信號。
停止反應(yīng):通過添加停止液(如硫酸或鹽酸)停止底物的反應(yīng),阻止進(jìn)一步顏色的發(fā)展。
讀取結(jié)果:使用ELISA閱讀器檢測各孔的吸光度(OD值),并據(jù)此計算待測樣本中抗原或抗體的濃度。
每個實驗室可能會有一些細(xì)微的差別和優(yōu)化步驟,具體操作可根據(jù)實驗室的具體要求和試劑盒的說明進(jìn)行調(diào)整。
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