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elisa實驗原理及步驟

日期:2023-07-17 16:31:19

    ELISA免疫學實驗用于檢測生物樣品中特定分子(如抗原或抗體)的存在和濃度。下面是ELISA實驗的基本原理和步驟:
 
ELISA實驗原理:
 
    具體來說,ELISA利用抗原與抗體之間的特異結合反應進行檢測。通常,抗原會被吸附在固相載體上,如微孔板表面。
    在檢測樣品中,如果包含與抗原相對應的抗體,它們會與固定在載體上的抗原發生結合。
    隨后,通過添加輔助抗體(通常是與酶結合的抗體),與已結合的抗體結合形成復合物。
    最后,通過添加酶底物,酶會催化底物的反應產生可測量的信號,如顏色變化。

ELISA實驗步驟:
 
    準備樣品:收集需要檢測的樣品,如血清、細胞上清液等,并進行必要的預處理,如稀釋或加入試劑。
 
    板涂抗原:將具有已知抗原性的溶液加入到微孔板中,使其吸附在孔底。
 
    阻斷:通過添加適當的蛋白質(如牛血清蛋白、BSA)來阻斷未被吸附的孔位,減少非特異性結合。
 
    加入樣品和對照:將待測樣品和已知濃度的對照樣品加入不同的孔中,通常進行多個重復。
 
    孵育:將板子封閉,并在適當的條件下(如溫度和時間)使抗原與樣品中的抗體發生結合反應。
 
    洗滌:將孔中的液體廢棄,然后用緩沖液洗滌孔位,以去除未結合的物質。
 
    添加檢測抗體:加入與特定抗原或抗體結合的酶標記抗體,并充分孵育。
 
    再次洗滌:洗滌掉未結合的酶標記抗體。
 
    加入底物:加入一個與酶標記相關的底物,例如TMB(3,3',5,5'-四甲基苯基二乙基苯并噻唑啉-2,2'-聯苯胺)。
 
    反應停止:通過加入適當的反應停止劑(如硫酸等),停止底物的反應。
 
    讀取結果:使用光度計等儀器,測量底物反應產生的信號的強度,并將其與標準曲線或對照樣品進行比較,以確定待測樣品中的目標分子的濃度。
 
    這些步驟是一般ELISA實驗的基本流程,具體步驟可能會因不同實驗目的、抗原/抗體類型和試劑盒品牌而有所差異。在進行ELISA實驗之前,建議參考相關實驗室手冊、文獻以及試劑的說明書,以確保正確而可靠的實驗結果。

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