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免疫酶技術elisa實驗步驟方法及報告分析

日期:2023-06-06 13:35:59


以下是一份免疫酶技術ELISA實驗報告,供參考。
 
一、實驗目的
 
    通過建立ELISA實驗方法,測定標本中特定抗原的含量。
 
二、實驗材料
 
    96孔板(Nunc Maxisorp);
    非特異性或特異性適配抗體;
    特異性酶標記抗體;
    酶標記底物;
    標準品或未知樣本。

三、實驗方法
 
1、板涂覆

    取出96孔板,在每個孔中加入100ul目標抗原或標準品,用洗滌緩沖液將其均勻涂覆,室溫靜置過夜。
 
2、板洗滌

    倒掉孔中液體,向每個孔中加入200ul洗滌緩沖液,輕輕震蕩10秒,倒掉液體,重復上述步驟3次。最后將孔中液體倒干,拍干背面。
 
3、板包被

    向每個孔中加入200ul阻斷緩沖液,室溫靜置2小時,再將阻斷液體倒掉。
 
4、孔添加樣本

    向每個孔中加入100ul未知樣本或標準品,室溫靜置2小時。
 
5、板洗滌

    將孔中液體倒掉,向每個孔中加入200ul洗滌緩沖液,輕輕震蕩10秒,倒掉液體,重復上述步驟3次。最后拍干背面。
 
6、添加酶標記抗體

    向每個孔中加入100ul已經稀釋好的酶標記抗體,室溫靜置1小時,注意避免陽性對照污染。
 
7、板洗滌

    重復步驟5。
 
8、加底物

    向每個孔中加入100ul酶標記底物,室溫靜置10-30分鐘直至顏色顯現。
 
9、反應停止

    向每個孔中加入50ul反應停止緩沖液 or ASW,注意反應停止緩沖液大小必須要與酶標記底物相配套。
 
10、測定吸光度

    用微孔板閱讀器測定每個孔的吸光度值。
 
四、實驗結果
 
    通過比較標準品的吸光值和未知樣本吸光值,計算出未知樣本含量。


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