T4 Polynucleotide Kinase試劑盒
日期:2023-05-31 13:39:13
T4 Polynucleotide Kinase試劑盒是一種用于DNA或RNA磷酸化修飾的試劑盒,適用于核酸分子標記、克隆及DNA測序等領域。本試劑盒基于T4多聚核苷酸激酶(T4 Polynucleotide Kinase),使未磷酸化的DNA或RNA通過與γ-32P輻射標記的ATP進行反應而被磷酸化修飾。下面將對T4 Polynucleotide Kinase試劑盒進行進一步介紹。
一、試劑組成
T4 Polynucleotide Kinase試劑盒包括:T4 Polynucleotide Kinase 酶(10U/µL)、10×T4 PNK緩沖液、10×PNK停止緩沖液、γ-32P輻射標記的ATP。
二、試劑盒使用步驟
1、將需要磷酸化修飾的DNA或RNA加入到聚丙烯酰胺凝膠中或者直接加入反應管中;
2、加入10×T4 PNK緩沖液;
3、加入5 µL γ-32P輻射標記的ATP;
4、加入1 µL T4 Polynucleotide Kinase酶;
5、37℃下反應1小時,或根據實驗要求反應不同時間;
6、加入10×PNK停止緩沖液終止反應;
7、在聚丙烯酰胺凝膠上或者直接在反應管中檢測磷酸化情況。
三、注意事項
1、實驗前需檢查T4 Polynucleotide Kinase試劑盒的有效期和儲存條件;
2、使用前需要對反應體系進行物質平衡測試;
3、操作時需佩戴手套,并保護眼睛和皮膚,避免γ-32P輻射造成傷害;
4、實驗后需將廢棄物處理掉,包括樣品、反應液等;
5、放射性試劑需要妥善保存和處理,避免對環境和人員帶來危害。
四、總結
T4 Polynucleotide Kinase試劑盒是一種方便、快速、高效的DNA或RNA磷酸化修飾試劑盒,在核酸分子標記、克隆及DNA測序等領域有著廣泛的應用。使用T4 Polynucleotide Kinase試劑盒需要注意操作步驟和安全事項,以確保實驗結果的準確性。
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