小鼠趨化因子CXCL12 elisa檢測(cè)試劑盒
日期:2023-05-26 11:05:28
小鼠趨化因子CXCL12在多個(gè)生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)是目前常用的測(cè)定小鼠CXCL12含量的方法之一。本文將介紹小鼠CXCL12 ELISA檢測(cè)試劑盒的操作步驟及相關(guān)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)。
1、實(shí)驗(yàn)材料:
(1) 小鼠CXCL12 ELISA檢測(cè)試劑盒(如武漢華美生物公司提供的)
(2) 小鼠血清或其他組織液體樣品
(3) 標(biāo)準(zhǔn)品(小鼠CXCL12蛋白標(biāo)準(zhǔn),如cusabio公司提供的)
(4) PBS緩沖液
(5) HRP發(fā)光底物
(6) 阻斷溶液
(7) ELISA微孔板、洗滌緩沖液
(8) 離心管、移液器等通用實(shí)驗(yàn)室工具
2、實(shí)驗(yàn)步驟:
(1) 標(biāo)準(zhǔn)品制備
將標(biāo)準(zhǔn)品按照說(shuō)明書(shū)中的濃度序列稀釋至不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列,例如:0pg/mL、15.6pg/mL、31.3pg/mL、62.5pg/mL、125pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL。將各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品分別加入微孔板中,不同濃度樣品均加入三個(gè)重復(fù)孔位,最后一個(gè)空孔位作為陰性對(duì)照。
(2) 樣品處理
將收集好的小鼠血清或其他組織液體樣品按照說(shuō)明書(shū)要求預(yù)處理,如需去除紅細(xì)胞、脂類等可以離心處理,再進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屩梁线m的濃度。每個(gè)樣品加入三個(gè)重復(fù)孔位。
(3) 添加試劑
將阻斷溶液加入微孔板中,室溫靜置30分鐘,然后倒掉溶液,用PBS緩沖液進(jìn)行洗滌,使微孔板反復(fù)洗滌3次。將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加入微孔板中,室溫下靜置2小時(shí)或過(guò)夜。每個(gè)孔位添加樣品或標(biāo)準(zhǔn)品100μL。
(4) 洗滌步驟
在每一步操作結(jié)束后,使用洗滌緩沖液洗滌微孔板,使微孔板反復(fù)洗滌3次,每次洗滌時(shí)間為30秒。
(5) 加入HRP發(fā)光底物
將HRP發(fā)光底物加入每個(gè)孔位中,室溫下靜置30-60分鐘,避免陽(yáng)性信號(hào)過(guò)強(qiáng)。每個(gè)孔位添加100μL。
(6) 讀板
使用ELISA檢測(cè)試劑盒所配套的酶標(biāo)儀測(cè)量各個(gè)孔位的吸光度值,記錄并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
(1) 操作前將試劑室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)消毒,保持干凈整潔;
(2) 嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),特別是樣品預(yù)處理和試劑使用量;
(3) 操作中嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間和溫度,避免操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致數(shù)據(jù)誤差;
(4) 操作時(shí)盡量避免振蕩或震動(dòng),以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果;
(5) 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如有異常情況出現(xiàn),應(yīng)及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。
4、結(jié)論
小鼠CXCL12 ELISA檢測(cè)試劑盒是一種常用的檢測(cè)小鼠CXCL12含量的方法,通過(guò)本文介紹的操作步驟可以準(zhǔn)確測(cè)定小鼠CXCL12的含量,并為相關(guān)疾病的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
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