sec外泌體提取試劑盒步驟
日期:2023-05-19 11:31:32
SEC (Size Exclusion Chromatography) 是一種常用的外泌體分離方法,可以將不同大小的外泌體進(jìn)行分離,從而提取純凈的外泌體。以下是一般SEC外泌體提取試劑盒步驟:
1、樣品處理:首先應(yīng)該選擇一個(gè)合適的細(xì)胞培養(yǎng)基或體液來(lái)收集樣品,離心去除細(xì)胞碎片、細(xì)胞核等雜質(zhì),然后將樣品保存在-80℃的冰柜中。
2、試劑準(zhǔn)備:將試劑盒中的緩沖液等試劑按照說(shuō)明書(shū)的要求配制好。注意保證試劑的新鮮度和純度。
3、樣品稀釋?zhuān)簩⒈鶅龅臉悠肪従徎?,在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行均勻分散。
4、樣品上清分離:將上述稀釋后的樣品采用離心管進(jìn)行離心,去除細(xì)胞碎片和非細(xì)胞完整體,留下上清液。
5、上清液過(guò)篩:將上清液通過(guò)0.22μm或更小孔徑的濾膜過(guò)濾,以去除殘留的大顆粒物。
6、SEC柱裝置:在SEC柱中填充固定相樹(shù)脂,并預(yù)先平衡樹(shù)脂至平衡緩沖液條件下。
7、樣品加載:將經(jīng)過(guò)過(guò)篩的樣品通過(guò)裝置好的SEC柱進(jìn)行加載,注意保證樣品不超過(guò)SEC柱承載能力。
8、沖洗收集:使用平衡緩沖液對(duì)SEC柱進(jìn)行沖洗,收集出流液。
9、上樣清洗液回收:收集每個(gè)分?jǐn)?shù)管中的上樣清洗液,并使用RNA提取試劑盒進(jìn)行RNA提取。
SEC法外泌體提取試劑盒操作相對(duì)簡(jiǎn)單,而抽提的外泌體更純凈,可以應(yīng)用于RNA、蛋白質(zhì)以及其他生物分子的研究。需注意SEC法對(duì)外泌體數(shù)量有一定的限制,可在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)行優(yōu)化、改進(jìn)。