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ELISA試劑盒的樣本收集與前期準備步驟

日期:2023-05-16 11:50:30


    ELISA酶標技術是通過共價化學結合將抗原或抗體固定在固相材料上,利用酶標記的二抗檢測樣品中特定抗原或抗體的方法。ELISA試劑盒是一種方便快捷的實驗工具,在進行實驗時,必須仔細準備并使用正確的技巧,才能得到可靠的結果。
 
下面將介紹ELISA試劑盒的標本收集與前期準備步驟。
 
樣本收集

    1、血清:離心法分離血清,避免紅細胞等其他成分的干擾。在離心前要先將采血管放置于室溫下不少于30分鐘,使血液處于自然凝集狀態,利于離心后分離血清。
 
    2、血漿:采用抗凝劑離心分離出血漿。血漿可用肝素、EDTA、檸檬酸鈉等抗凝劑穩定,并有利于防止凝塊的形成。
 
    3、尿、唾液、汗液等分泌物:采集時要注意不要將其他物質加入樣品中,以免影響后續實驗。
 
    4、細胞培養上清液:細胞培養上清液可用于檢測蛋白質或抗體的表達和分泌情況。
 
    5、其他標本:如組織液、腦脊液等,采集前應仔細查看試劑盒說明書,了解樣品類型、收集方法和儲存條件等要求。
 
樣本前處理

     1、離心:除尿液、唾液等外,所有樣本都要進行離心分離出液體,避免顆粒和污染物對結果產生影響。
 
    2、稀釋:如樣品濃度過高,需將其稀釋至試劑盒檢測范圍內,否則會影響分析結果。
 
    3、加熱:如血清、血漿等樣品,需要用65℃水浴加熱30分鐘,使其凝集蛋白變性,防止干擾因子的影響。
 
樣品處理

    樣品處理是ELISA實驗的一個重要步驟。在樣品處理中,我們需要按照試劑盒說明書的要求進行操作,包括以下步驟:
 
    1、涂覆:將樣品加入ELISA板中,與固定在板上的特定抗體或抗原結合。涂覆前要先準備好試劑盒中的稀釋緩沖液、洗滌緩沖液等。
 
    2、阻滯:用阻滯緩沖液阻止樣品非特異性吸附NSB。
 
    3、洗滌:利用洗滌緩沖液去除未結合的成分和NSB,減少干擾因子的影響。
 
    4、檢測:樣品與檢測抗體結合后,加入酶標記的輔助抗體,形成抗原、一級抗體、二級抗體的復合體,經洗滌后加入底物,使酶催化底物變色或發光。
 
結果分析

    根據elisa試劑盒說明書的要求,對ELISA結果進行分析。如有質控樣品,可以通過質控樣品的結果,評估實驗的準確性和穩定性。按照試劑盒說明書的要求,記錄實驗的各項數據,便于后續結果分析和討論。
 
    ELISA試劑盒雖然操作簡單,但缺乏認真仔細的樣品收集和前期準備步驟,就無法得到準確可靠的結果。因此,在進行ELISA實驗時要注意仔細閱讀說明書、規范操作、嚴格控制實驗條件,才能取得令人滿意的實驗結果。


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