外泌體提取工藝步驟
日期:2023-04-03 15:46:10
外泌體提取的一般工藝流程:
細胞培養:首先需要選擇外泌體分泌比較豐富的細胞,如HEK293、THP-1等,進行培養。
收集細胞上清:收集細胞培養上清,可以通過離心或濾過等方式去除細胞碎片和細胞核等雜質。
初步離心:對細胞上清進行初步離心,去除較大的微粒和細胞碎片等,一般采用低速離心(如3000×g,10分鐘)。
超速離心:對初步離心后的上清進行超速離心,去除較小的微粒和小泡,一般采用高速離心(如10000×g,30分鐘)。
濾過:對離心后的上清進行濾過,去除大分子雜質,如細胞核等。
再次超速離心:對濾過后的上清進行再次超速離心,分離出外泌體,一般采用最高速離心(如100000×g,70分鐘)。
懸浮液洗滌:將分離出的外泌體懸浮于PBS等緩沖液中,進行洗滌。
再次超速離心:將洗滌后的外泌體進行再次超速離心,去除洗滌緩沖液和雜質。
終末懸液:將去除雜質的外泌體懸浮于PBS等緩沖液中,形成最終的外泌體提取物。
外泌體提取工藝需要注意去除雜質和細胞碎片等,以保證提取的外泌體純度和活性。同時,外泌體提取也需要根據實驗要求進行優化和調整。
細胞培養:首先需要選擇外泌體分泌比較豐富的細胞,如HEK293、THP-1等,進行培養。
收集細胞上清:收集細胞培養上清,可以通過離心或濾過等方式去除細胞碎片和細胞核等雜質。
初步離心:對細胞上清進行初步離心,去除較大的微粒和細胞碎片等,一般采用低速離心(如3000×g,10分鐘)。
超速離心:對初步離心后的上清進行超速離心,去除較小的微粒和小泡,一般采用高速離心(如10000×g,30分鐘)。
濾過:對離心后的上清進行濾過,去除大分子雜質,如細胞核等。
再次超速離心:對濾過后的上清進行再次超速離心,分離出外泌體,一般采用最高速離心(如100000×g,70分鐘)。
懸浮液洗滌:將分離出的外泌體懸浮于PBS等緩沖液中,進行洗滌。
再次超速離心:將洗滌后的外泌體進行再次超速離心,去除洗滌緩沖液和雜質。
終末懸液:將去除雜質的外泌體懸浮于PBS等緩沖液中,形成最終的外泌體提取物。
外泌體提取工藝需要注意去除雜質和細胞碎片等,以保證提取的外泌體純度和活性。同時,外泌體提取也需要根據實驗要求進行優化和調整。
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