酵母雙雜交篩選互作蛋白
日期:2023-03-29 10:45:23
酵母雙雜交(Y2H)是一種常用的蛋白質相互作用篩選技術,可用于鑒定蛋白質之間的相互作用關系。其基本原理是將兩個蛋白質分別融合到兩個不同的轉錄激活子(DNA結合區和激活區)中,當兩個融合蛋白質相互作用時,轉錄激活子得以重組,使報告基因表達。
在酵母雙雜交篩選互作蛋白的過程中,一般分為以下步驟:
構建融合蛋白質的表達載體:首先需要構建兩個表達融合蛋白質的質粒,每個質粒含有一個轉錄激活子和一個融合基因。其中一個質粒中搭載“魚叉”(bait)融合基因,另一個質粒中搭載“獵物”(prey)融合基因。
酵母雙雜交:將兩種表達融合蛋白質的酵母菌株進行交叉配對,使bait融合蛋白質與prey融合蛋白質發生相互作用,形成一個復合物。
篩選:通過對生長培養基的篩選,篩選出能夠生長和表達報告基因的菌落。
驗證:對所得陽性菌落進行鑒定和驗證,包括測序和再次雙雜交驗證。
通過酵母雙雜交技術,可以鑒定蛋白質之間的相互作用關系,進而揭示蛋白質在細胞內的功能和調控機制,為生物學研究提供了重要的工具。
在酵母雙雜交篩選互作蛋白的過程中,一般分為以下步驟:
構建融合蛋白質的表達載體:首先需要構建兩個表達融合蛋白質的質粒,每個質粒含有一個轉錄激活子和一個融合基因。其中一個質粒中搭載“魚叉”(bait)融合基因,另一個質粒中搭載“獵物”(prey)融合基因。
酵母雙雜交:將兩種表達融合蛋白質的酵母菌株進行交叉配對,使bait融合蛋白質與prey融合蛋白質發生相互作用,形成一個復合物。
篩選:通過對生長培養基的篩選,篩選出能夠生長和表達報告基因的菌落。
驗證:對所得陽性菌落進行鑒定和驗證,包括測序和再次雙雜交驗證。
通過酵母雙雜交技術,可以鑒定蛋白質之間的相互作用關系,進而揭示蛋白質在細胞內的功能和調控機制,為生物學研究提供了重要的工具。
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