在线日韩日本国产亚洲丨少妇伦子伦情品无吗丨欧美性猛交xxxx免费看蜜桃丨精品人妻系列无码一区二区三区丨亚洲精品无码不卡在线播放

Your Good Partner in Biology Research

重組蛋白在原核表達(dá)系統(tǒng)中常出現(xiàn)包涵體表達(dá),如何解決這一問題?

日期:2025-04-02 13:22:00

    在原核表達(dá)系統(tǒng)中,重組蛋白出現(xiàn)包涵體表達(dá)的原因主要是蛋白折疊不正確、表達(dá)量過高以及細(xì)胞內(nèi)環(huán)境不適宜等。以下是一些解決包涵體問題的方法:
 
1.優(yōu)化表達(dá)條件
        降低誘導(dǎo)溫度:較低的溫度可以減緩蛋白合成速度,使蛋白有更多時(shí)間進(jìn)行正確折疊。一般可將誘導(dǎo)溫度從 37℃降至 16 - 25℃,具體溫度需通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。例如,在表達(dá)某些膜蛋白時(shí),將溫度控制在 20℃左右,可顯著減少包涵體的形成。
 
        減少誘導(dǎo)劑濃度:降低誘導(dǎo)劑(如 IPTG)的濃度,能降低重組蛋白的表達(dá)速度,有助于蛋白正確折疊??梢試L試將 IPTG 濃度從常規(guī)的 1 mM 降低至 0.1 - 0.5 mM。
 
        縮短誘導(dǎo)時(shí)間:適當(dāng)縮短誘導(dǎo)時(shí)間,避免蛋白過度表達(dá)而形成包涵體。誘導(dǎo)時(shí)間可從常規(guī)的 4 - 6 小時(shí)調(diào)整為 2 - 4 小時(shí),然后根據(jù)表達(dá)情況進(jìn)行優(yōu)化。
 
\

 
2.優(yōu)化載體設(shè)計(jì)
        更換啟動(dòng)子:選擇較弱的啟動(dòng)子,使重組蛋白的表達(dá)水平適中,減少因表達(dá)量過高導(dǎo)致的包涵體形成。例如,將強(qiáng)啟動(dòng)子 T7 替換為相對(duì)較弱的 trc 或 lac 啟動(dòng)子。
 
        添加融合標(biāo)簽:在目標(biāo)蛋白的 N 端或 C 端添加融合標(biāo)簽,如谷胱甘肽 S - 轉(zhuǎn)移酶(GST)、麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)等。這些標(biāo)簽可以幫助蛋白正確折疊,增加蛋白的可溶性,同時(shí)也有利于后續(xù)的純化。
 
3.優(yōu)化宿主菌選擇
        選擇蛋白酶缺陷型菌株:某些宿主菌缺失了一些蛋白酶,能夠減少對(duì)重組蛋白的降解,使蛋白更易以可溶形式表達(dá)。如 BL21(DE3)pLysS 菌株,其含有溶菌酶基因,可降低細(xì)胞內(nèi)的蛋白酶活性。
 
        選用分子伴侶輔助表達(dá)菌株:一些菌株如 Rosetta - gami B(DE3)pLysS 含有額外的分子伴侶和折疊酶,能幫助重組蛋白正確折疊,提高其可溶性。
 
4.改善培養(yǎng)條件
        優(yōu)化培養(yǎng)基成分:調(diào)整培養(yǎng)基中的碳源、氮源、微量元素等成分,以滿足重組蛋白表達(dá)和折疊的需求。例如,增加培養(yǎng)基中甘氨酸、脯氨酸等有助于蛋白折疊的氨基酸含量。
 
        控制 pH 值:維持合適的 pH 值有助于蛋白的正確折疊。一般來說,中性或略偏堿性的環(huán)境(pH 7.0 - 7.5)有利于大多數(shù)蛋白的表達(dá)和溶解。
 
5.包涵體的處理與復(fù)性
        包涵體的溶解:如果包涵體已經(jīng)形成,可以采用變性劑如尿素、鹽酸胍等將其溶解,使蛋白變?yōu)榫€性結(jié)構(gòu)。然后通過透析、稀釋等方法去除變性劑,使蛋白在體外重新折疊。
 
        復(fù)性條件優(yōu)化:復(fù)性過程中,需要優(yōu)化復(fù)性緩沖液的成分、溫度、pH 值等條件。例如,在復(fù)性緩沖液中加入氧化 - 還原試劑如谷胱甘肽,有助于蛋白二硫鍵的正確形成。同時(shí),緩慢降低變性劑濃度,避免蛋白重新聚集。

主站蜘蛛池模板: 99亚洲男女激情在线观看| 久久国产精品_国产精品| 欧美日韩在线视频一区| 乱码av麻豆丝袜熟女系列| 曰韩欧美群交p片内射| 一区二区狠狠色丁香久久婷婷| 真人床震高潮全部视频免费| 欧美激情精品久久| 中文字幕日本特黄aa毛片| 婷婷丁香五月天综合东京热| 日日av拍夜夜添久久免费| 精品乱码一区内射人妻无码| 精品视频一区二区三三区四区| 麻豆专媒体一区二区| 特级做a爰片毛片免费看| 偷拍区清纯另类丝袜美腿| 天堂资源中文最新版在线一区| 亚洲日本va在线视频观看| 久久精品久久久久观看99水蜜桃| 熟女人妻在线视频| 无码国模产在线观看免费| 国产男女免费完整视频网页| 国产白嫩美女在线观看| 免费观看又污又黄在线观看| 亚洲日韩av无码一区二区三区人 | 色窝窝免费播放视频在线| 亚洲爆乳少妇无码激情| 欧美丰满一区二区免费视频| 免费人成在线视频无码| 久久人人做人人妻人人玩精品va| 国产成人综合久久亚洲精品| 国产精品99久久免费黑人人妻 | 欧美怡春院一区二区三区| 国产露脸精品产三级国产av| 任我爽橹在线视频精品583| 亚洲欧美另类久久久精品| 四虎影视精品永久在线观看| 中文字幕人妻被公上司喝醉506| 日韩人妻一区二区三区蜜桃视频| 国产性猛交╳xxx乱大交| 青娱国产区在线|