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sds聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白的過(guò)程

日期:2023-09-21 10:27:39

    SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是常用的蛋白質(zhì)分離和純化技術(shù)。下面是SDS-PAGE分離蛋白的一般過(guò)程:
 
1、制備凝膠
    a. 準(zhǔn)備垂直電泳槽,安裝并固定凝膠板。
 
    b. 準(zhǔn)備堆積凝膠(通常為聚丙烯酰胺凝膠),配制緩沖液并加入聚合物和交聯(lián)劑。
 
    c. 混合均勻后,將混合溶液倒入凝膠板之間的空隙,插入梳子以形成樣品孔。
 
    d. 待凝膠完全固化后,取出梳子。
 
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2、樣品處理
    a. 將待測(cè)的蛋白樣品與Laemmli緩沖液混合,通常在樣品中加入還原劑如β-巰基乙醇和變性劑SDS。
 
    b. 在樣品中進(jìn)行煮沸處理,通常使用沸水浴,以保證樣品中蛋白質(zhì)被變性并與SDS結(jié)合。
 
3、裝載樣品
    a. 將處理好的蛋白樣品滴入凝膠板的樣品孔中,盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
 
    b. 所有待測(cè)樣品裝載完成后,加入電泳緩沖液(通常是Tris-Glycine緩沖液),使凝膠完全浸沒(méi)在緩沖液中。
 
4、電泳
    a. 將電泳槽連接到電源,并設(shè)置合適的電壓和時(shí)間。
 
    b. 通常使用恒定電流方式進(jìn)行電泳,使蛋白質(zhì)在凝膠中移動(dòng),根據(jù)大小分離成不同位置的帶狀條紋。
 
    c. 當(dāng)電泳結(jié)束時(shí),關(guān)閉電源,取出凝膠。
 
5、凝膠染色和可視化
    a. 將凝膠浸泡在蛋白染色劑(如Coomassie藍(lán)染料)溶液中,使蛋白質(zhì)帶顯現(xiàn)出顏色。
 
    b. 清洗凝膠,去除多余的染料。
 
    c. 可以使用透明的酸性背景板觀察帶狀條紋,也可以使用蛋白質(zhì)成像設(shè)備進(jìn)行數(shù)字化的分析和記錄。
 
    通過(guò)上述步驟,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)樣品的分離和定量,并且可以進(jìn)一步進(jìn)行后續(xù)的蛋白質(zhì)分析和鑒定。請(qǐng)注意,具體實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)根據(jù)所用設(shè)備和試劑的說(shuō)明進(jìn)行。

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