蛋白表達量的測定注意事項
日期:2023-09-03 16:48:06
蛋白表達量的測定是蛋白質相關實驗中非常重要的一步,下面是蛋白表達量測定的注意事項:
采用合適的蛋白表達系統:選擇適合表達目標蛋白的蛋白表達系統非常重要,常用的表達系統包括大腸桿菌、哺乳動物細胞、酵母等。在選擇表達系統的時候需要考慮表達量、純度、易于操作等方面因素。
平衡表達量和細胞生長速度:表達目標蛋白時,過高的表達量容易導致細胞毒性增加,從而抑制細胞生長,降低蛋白質產量。因此,平衡表達量和細胞生長速度是很重要的。
合適的收獲時間:蛋白表達量通常與表達時間相關,必須選擇合適的收獲時間。收獲時間過早,表達量可能不足;收獲時間過晚,目標蛋白質可能被降解、稀釋或錯誤折疊等。

正確的蛋白提取方法:蛋白質提取方法應根據表達系統和目標蛋白質特點選擇,常用方法包括直接裂解法、溶解-重結晶法以及針對膜蛋白的特殊提取方法等。
準確測量蛋白質濃度:準確測量蛋白質濃度是蛋白表達量測定的前提。常用方法包括BCA、 Bradford、Lowry等。需要注意測定時需要減少潛在的干擾物質和誤差。
使用合適的質控標準:使用合適的質控標準可以使蛋白表達量的測定更加準確。例如,采用外源蛋白作為內校準,或采用多個獨立的蛋白樣品進行數據校驗。
在蛋白表達量測定過程中還需要遵守實驗室的操作規范,保證實驗的可重復性和結果的準確性。
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