MBP蛋白標(biāo)簽純化流程
日期:2023-08-10 15:36:33
MBP蛋白標(biāo)簽(Maltose-Binding Protein tag)是常用的蛋白純化標(biāo)簽之一,可用于高效純化目標(biāo)蛋白。以下是一般的MBP蛋白標(biāo)簽純化流程:
克隆構(gòu)建:將目標(biāo)蛋白的編碼序列與MBP標(biāo)簽的編碼序列連接在一起,構(gòu)建目標(biāo)蛋白-MBP融合蛋白的表達(dá)載體。
表達(dá):將目標(biāo)蛋白-MBP融合蛋白的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞中,如大腸桿菌(E. coli)表達(dá)系統(tǒng)。
培養(yǎng)和誘導(dǎo):在含有適當(dāng)抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,使其擴(kuò)增到一定密度后,加入適量的誘導(dǎo)劑(如異丙基硫代半乳糖苷,IPTG),誘導(dǎo)蛋白的表達(dá)。
細(xì)胞收獲:培養(yǎng)一定時(shí)間后,收取細(xì)胞,通常通過(guò)離心將細(xì)胞沉淀下來(lái)。
細(xì)胞破碎:使用適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ绯暡ㄌ幚砘驒C(jī)械破碎)破碎細(xì)胞,釋放內(nèi)部蛋白質(zhì)。
親和純化:將細(xì)胞裂解液與MBP結(jié)合基質(zhì)(如丙糖醛酸瓊脂糖樹(shù)脂,amylose resin)進(jìn)行孵育,使MBP蛋白通過(guò)特異性結(jié)合捕獲目標(biāo)蛋白-MBP融合蛋白。
洗脫:通過(guò)適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液解離目標(biāo)蛋白-MBP融合蛋白與結(jié)合基質(zhì)的相互作用,將目標(biāo)蛋白從純化樹(shù)脂上洗脫出來(lái)。
純化檢測(cè):采用各種蛋白質(zhì)分析方法(如SDS-PAGE)檢測(cè)純化后的目標(biāo)蛋白樣品,確認(rèn)其純度和活性。

MBP蛋白標(biāo)簽純化流程可能因?qū)嶒?yàn)條件和目標(biāo)蛋白的特性而有所差異。在具體操作中,優(yōu)化步驟、緩沖液和條件的選擇對(duì)于確保高效純化蛋白的成功至關(guān)重要。
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