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重組蛋白akta純化流程

日期:2023-08-03 13:25:12

    重組蛋白的純化過程可以使用AKTA蛋白純化系統(tǒng)來完成。以下是一般的AKTA純化流程:
 
準(zhǔn)備工作
 
    將用于純化的介質(zhì)(如親和層析柱、離子交換層析柱、凝膠過濾柱等)連接到AKTA系統(tǒng)上。
確保純化過程中所需的緩沖液和溶劑已準(zhǔn)備好,并經(jīng)過消毒和去除氣泡。

樣品加載
 
    將包含目標(biāo)蛋白的樣品通過注射器或自動進樣器輸入至AKTA系統(tǒng)。
    設(shè)置合適的進樣量和流速,使得樣品能夠被純化柱充分與之接觸。
 
洗脫緩沖
 
    使用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液在純化柱上進行洗脫。具體的洗脫緩沖液配方和洗脫條件可以根據(jù)純化柱的性質(zhì)和目標(biāo)蛋白的特性進行調(diào)整。
 
純化柱洗脫
 
    在洗脫緩沖液的作用下,目標(biāo)蛋白與純化柱上的固定相相互作用,從而實現(xiàn)目標(biāo)蛋白的捕獲。
    調(diào)整洗脫緩沖液的成分和條件,以實現(xiàn)目標(biāo)蛋白的選擇性洗脫和純化。
 
再平衡(Equilibration):
 
    在洗脫完畢后,使用再平衡緩沖液將純化柱恢復(fù)至初始狀態(tài),以便進行下一次純化循環(huán)或存儲。
 
洗滌和再生
 
    在純化過程中可能需要定期對純化柱進行洗滌和再生,以去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)和恢復(fù)固定相的活性。
 
監(jiān)測純化效果
 
    可以使用各種技術(shù)(如SDS-PAGE、Western blot、ELISA等)來監(jiān)測純化過程中目標(biāo)蛋白的存在和純度。

    具體的純化流程和參數(shù)設(shè)置會受到目標(biāo)蛋白的性質(zhì)、純化柱的類型以及實驗室的具體要求等因素的影響。因此,在實際操作中,應(yīng)根據(jù)具體情況進行優(yōu)化和調(diào)整,并參考相關(guān)的AKTA系統(tǒng)操作手冊和相關(guān)文獻(xiàn)資料。

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