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AKTA蛋白純化步驟

日期:2023-07-28 13:35:20


    AKTA是常用的蛋白質(zhì)純化系統(tǒng),廣泛應(yīng)用于生物分子的純化和制備。下面是一般使用AKTA系統(tǒng)進(jìn)行蛋白純化的步驟:
 
準(zhǔn)備工作
 
    將需要純化的蛋白樣品預(yù)處理,如細(xì)胞破碎、超速離心等,以獲得目標(biāo)蛋白的提取物。
    準(zhǔn)備好所需的純化介質(zhì)和緩沖溶液:根據(jù)目標(biāo)蛋白的性質(zhì)選擇合適的親和層析介質(zhì)、離子交換層析介質(zhì)或其他純化介質(zhì),并配置相應(yīng)的緩沖溶液。
 
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設(shè)定AKTA系統(tǒng)參數(shù)
 
    將純化介質(zhì)裝填到柱子中,并將柱子安裝到AKTA系統(tǒng)上。
    設(shè)置流速、梯度程序和檢測波長等操作參數(shù),根據(jù)具體純化方法和目標(biāo)蛋白的特性進(jìn)行設(shè)定。
 
樣品加載
 
    將預(yù)處理好的蛋白樣品注入到AKTA系統(tǒng)中的注射器或自動注射器中。
在設(shè)定的流速下,將樣品通過柱子,使樣品中的目標(biāo)蛋白與純化介質(zhì)發(fā)生特異性結(jié)合。
 
柱洗脫
 
    根據(jù)純化介質(zhì)的特性和純化策略,使用合適的洗脫緩沖溶液沖洗柱子,去除非特異性結(jié)合的雜質(zhì)。
    注入高濃度洗脫緩沖溶液,使目標(biāo)蛋白與純化介質(zhì)解離。
 
方案收集
 
    設(shè)置合適的方案收集方式,可以按分?jǐn)?shù)收集純化的樣品。
    監(jiān)控波長進(jìn)行實時檢測并根據(jù)信號強度進(jìn)行分?jǐn)?shù)收集。

評估純化后的樣品
 
    通過SDS-PAGE、Western blot等方法對純化后的樣品進(jìn)行分析,評估純化效果和目標(biāo)蛋白的純度。
    具體的步驟可能會因純化介質(zhì)、目標(biāo)蛋白的性質(zhì)和純化策略的不同而有所變化。因此,在進(jìn)行蛋白純化時,建議參考相關(guān)的文獻(xiàn)和廠家提供的操作手冊,并根據(jù)實際情況進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。

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