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gst標(biāo)簽蛋白純化原理

日期:2023-07-27 14:39:58


    GST標(biāo)簽是一種常用的蛋白純化標(biāo)簽,它利用谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)與谷胱甘肽(glutathione)之間的高親和力來純化目標(biāo)蛋白。以下是GST標(biāo)簽蛋白純化的原理:
 
    構(gòu)建融合蛋白:在目標(biāo)蛋白的N端或C端連接GST標(biāo)簽,構(gòu)建GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白。
 
    細(xì)胞表達(dá):將GST-目標(biāo)蛋白融合基因?qū)胨拗骷?xì)胞,使其表達(dá)GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白。
 
    細(xì)胞裂解:對表達(dá)的細(xì)胞進行裂解,釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。
 
    親和層析:使用谷胱甘肽瓊脂糖珠(如Glutathione Sepharose)或磁珠等含有谷胱甘肽結(jié)合物的柱子,將裂解的細(xì)胞提取物加載到柱子中。由于GST與谷胱甘肽的高親和力,GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白會與柱子上的谷胱甘肽結(jié)合物結(jié)合。
 
    洗脫:通過洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì),保留結(jié)合的GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白。
 
    解離:通過加入過量的還原劑、酸或其他解離條件,將GST-目標(biāo)蛋白融合蛋白與谷胱甘肽結(jié)合物解離。
 
    蛋白收集:收集解離后的目標(biāo)蛋白,即純化得到的目標(biāo)蛋白。
 
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    GST標(biāo)簽蛋白純化原理的關(guān)鍵在于利用GST與谷胱甘肽之間的高親和力。谷胱甘肽作為固相材料,能夠選擇性地捕獲含有GST標(biāo)簽的融合蛋白,而非融合蛋白等其他細(xì)胞組分。通過洗脫和解離步驟,目標(biāo)蛋白可以從柱子上被分離和純化出來。這種方法簡單、高效,特別適用于大規(guī)模蛋白純化和高表達(dá)的目標(biāo)蛋白。

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