gst蛋白純化原理
日期:2023-07-18 15:37:53
GST蛋白純化是一種常用的蛋白質純化方法,其中GST代表谷胱甘肽S轉移酶(glutathione S-transferase),它可以與特定的GST標簽融合的目標蛋白結合,并利用這個特定結合關系實現目標蛋白的純化。
GST蛋白純化的原理如下:
融合表達:在目標蛋白的編碼序列的N-或C-端附加GST標簽,使其與GST蛋白融合成為一個重組蛋白。
細胞培養和表達:將融合蛋白的基因導入到表達宿主細胞中,通過合適的誘導條件,如添加適量的誘導劑(例如IPTG),使細胞開始表達GST融合蛋白。
細胞破碎和裂解:收獲經過誘導表達的細胞,并通過物理方法(如超聲波破碎)或化學方法(如溶菌酶處理)破碎細胞膜,釋放融合蛋白。
GST親和層析:將溶解的GST融合蛋白與具有親和力的物質(如谷胱甘肽瓊脂糖,glutathione agarose)結合,形成GST-目標蛋白復合物。
洗脫和純化:通過洗脫步驟去除非特異結合的雜質蛋白,保留GST-目標蛋白復合物。一般采用緩沖液改變pH值或濃度梯度逐步洗脫。
重組蛋白的后處理:如果需要分離目標蛋白與GST標簽,則進行進一步的處理,例如利用特定的蛋白酶對標簽進行切割。
GST蛋白純化原理的關鍵在于利用GST標簽與谷胱甘肽瓊脂糖的結合能力,實現對目標蛋白的選擇性結合和純化。這種方法廣泛應用于分子生物學和生物化學研究中,可以快速、有效地純化目標蛋白。
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