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wb轉膜條件與膠濃度有關嗎

日期:2023-04-12 10:53:39

Western blot(WB)是分子生物學和免疫學中常用的一種分析蛋白質的技術。它通過電泳將不同蛋白質分離,然后將其轉移到膜上,再使用特異性抗體檢測目標蛋白質。這個過程稱為Western blotting,而將蛋白質轉移到膜上的過程則稱為blotting。本文將提供WB轉膜的條件。

    WB轉膜是Western blotting中非常關鍵的一步,它需要將電泳的膠液中的蛋白質轉移到膜上,從而方便我們進行后續實驗。下面就是WB轉膜的條件:

    蛋白質載體的選擇:WB膜通常是由聚氟乙烯(PVDF)或硝酸纖維素(NC)制成,兩者均可選擇。

    轉移緩沖液的pH值:常用的轉移緩沖液是含Tris和甘氨酸的Transfer buffer。對于PVDF膜,可以使用低pH的轉移緩沖液,pH值可以在6.0~6.4之間。如果使用硝酸纖維素的膜,則需要使用高pH的轉移緩沖液,在pH值為8.3左右。

    轉移緩沖液的離子強度:轉移緩沖液中氯離子的濃度應該在25~30 mM之間,而甘氨酸的濃度應該在
10%(w/v)左右。這樣可以保證緩沖液中有足夠的離子來促進蛋白質的電泳遷移。

    蛋白質遷移時間:蛋白質遷移時間是一個關鍵參數,必須根據實驗需要和膠的類型來確定。通常情況下,PVDF膜的轉移時間在1.5~2小時左右,而硝酸纖維素膜的轉移時間則需要更長一些,大約在16~24小時。

    蛋白質遷移電流密度:電流密度的大小將會影響到蛋白質遷移速率和膜上轉移效果。一般情況下,電流密度可以設置為0.8~1 mA/cm2。同時也需要注意,電流密度不能過大,否則可能會導致蛋白質燒焦。

轉移膜的溫度:轉移溫度可以影響到蛋白質電泳遷移的速率和均勻性。通常情況下,轉移膜的溫度在4℃左右可以保證較好的效果。

對于不同的實驗和要求,條件也有所不同。選擇合適的轉膜條件可以在一定程度上提高實驗的成功率和準確性。

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