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蛋白質分離并檢測蛋白表達的方法

日期:2023-03-10 15:34:19

蛋白質提取 Western Blotting(WB)是一種常用的分離蛋白質并檢測蛋白質表達的方法。以下是一般蛋白質提取 Western Blotting 的步驟:
1.細胞裂解:用裂解液將細胞破裂,使蛋白質裸露出來。
2.離心:離心使得細胞的碎片、DNA等雜質沉淀下來,得到蛋白質上清液。
3.測定蛋白質濃度:使用BCA或者Lowry方法等常見方法測定蛋白質的濃度。
4.電泳:將提取的蛋白質樣品通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進行分離,分離后的蛋白質可被轉移到膜上。
5.膜轉移:將凝膠上分離出來的蛋白質轉移到聚乙烯醇基礎的膜上。
6.封閉:將轉移后的膜在牛奶粉中進行非特異性的封閉。
7.抗體反應:用特異性抗體與膜上的蛋白質結合。
8.檢測:將特異性抗體標記上標記物檢測抗體與膜上蛋白質結合的情況。
需要注意的是,蛋白質提取的具體方法需要根據不同的樣本和目的進行優化和調整。常見的蛋白質提取方法包括:RIPA緩沖液、NP-40緩沖液、Tris-HCl緩沖液、SDS緩沖液等。

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