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怎么優(yōu)化大腸桿菌表達系統(tǒng)的蛋白產量?

日期:2025-05-20 11:05:03

1、載體與宿主菌匹配
    選擇強啟動子(如 T7、λPR 啟動子)和合適的核糖體結合位點(RBS)增強轉錄和翻譯效率;
    根據蛋白特性選擇宿主菌:
        BL21(DE3):適合誘導型表達,蛋白酶活性低,常用于重組蛋白生產;
        Origami 系列:含硫氧還蛋白還原酶(trxB)和谷胱甘肽還原酶(gor)突變,促進胞內二硫鍵形成,適合分泌型蛋白表達。
 
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2、培養(yǎng)條件優(yōu)化
    溫度:低溫(18-25℃)可減少包涵體形成,促進可溶性蛋白表達;
    誘導劑濃度與時機:低濃度 IPTG(如 0.1 mM)或乳糖自誘導可避免代謝負擔;對數中期(OD???=0.6-0.8)誘導最佳;
    培養(yǎng)基成分:使用富含氨基酸的培養(yǎng)基(如 TB、2×YT)或補加葡萄糖、甘油等碳源,維持菌體生長和蛋白合成。
 
3、融合標簽與純化策略
    添加親和標簽(如 His?、GST、MBP)提高蛋白可溶性并簡化純化流程;
    使用蛋白酶(如 TEV、Factor Xa)切除標簽,恢復蛋白天然活性。

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