在线日韩日本国产亚洲丨少妇伦子伦情品无吗丨欧美性猛交xxxx免费看蜜桃丨精品人妻系列无码一区二区三区丨亚洲精品无码不卡在线播放

Your Good Partner in Biology Research

酵母雙雜交自激活驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)步驟

日期:2023-08-21 16:47:33

    酵母雙雜交(Yeast Two-Hybrid)是常用的蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。在進(jìn)行雙雜交自激活驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)時,可以按照以下步驟進(jìn)行操作:

\
 
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
 
    準(zhǔn)備兩個酵母菌株:一個是用于檢測蛋白質(zhì)自激活的菌株(例如AH109),另一個是作為質(zhì)粒攜帶者和報告基因表達(dá)的菌株(例如Y187)。
 
    構(gòu)建融合蛋白質(zhì)的載體:將待檢測蛋白的編碼序列克隆到適當(dāng)?shù)碾p雜交載體中,通常包括激活區(qū)域(AD)和DNA結(jié)合區(qū)域(BD)。
 
    驗(yàn)證載體的無毒性:通過轉(zhuǎn)化含有空載體的菌株來驗(yàn)證載體本身不會導(dǎo)致菌株生長異常。


 
轉(zhuǎn)化酵母菌株
 
    將質(zhì)粒攜帶者(例如Y187)和融合蛋白質(zhì)的載體(例如AH109)分別線性化,然后通過化學(xué)方法或電擊法將線性化DNA轉(zhuǎn)化到相應(yīng)的酵母菌株中。
 
    進(jìn)行選擇培養(yǎng):將轉(zhuǎn)化后的酵母菌分別移植到含有選擇性培養(yǎng)基的平板上,以篩選出具有正確載體的菌落。


 
進(jìn)行交互檢測
 
    鑒定陽性相互作用:將篩選得到的陽性菌落分別提取DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列分析,確認(rèn)融合蛋白質(zhì)的正確定序。
 
    進(jìn)行雙雜交驗(yàn)證:將陽性菌株分別轉(zhuǎn)化到兩個不同的抗性選擇培養(yǎng)基中(例如TDO和QDO培養(yǎng)基),觀察是否出現(xiàn)報告基因(如 HIS3、Ade2和LacZ)表達(dá)的現(xiàn)象。
設(shè)置對照組:設(shè)置空載體對照和已知相互作用的陽性對照,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。


 
結(jié)果分析
 
    觀察菌落生長情況:在選擇培養(yǎng)基上觀察菌落生長,陽性菌株應(yīng)在TDO和QDO培養(yǎng)基上能夠生長。
 
    檢測報告基因表達(dá):使用相應(yīng)的檢測方法(如X-gal染色、HIS3和Ade2的活性檢測)來測試報告基因的表達(dá)水平,以確認(rèn)蛋白質(zhì)的相互作用。
 
    以上步驟僅概述了雙雜交自激活驗(yàn)證的基本流程,具體的實(shí)驗(yàn)操作和條件可能因?qū)嶒?yàn)?zāi)康暮驮噭┖械炔煌兴町悺T谶M(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,請仔細(xì)閱讀相關(guān)文獻(xiàn)和試劑盒的說明,并按照其中提供的操作指南進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

主站蜘蛛池模板: 欧美亚洲日本国产综合在线| 人人妻人人澡人人爽人人精品浪潮| 国内自产少妇自拍区免费| 天天做天天爱天天要天天| 强制高潮18xxxxhd日韩| 精品国产第一国产综合精品| 久久久这里只有免费精品| 亚洲精品国产精品国产自2022| av无码国产在线看免费网站| 精品丰满人妻无套内射| 日韩激情无码免费毛片| 国产情侣激情在线视频| 亚洲国产欧美在线成人aaaa| 成人aaa片一区国产精品| 久久亚洲一区二区三区四区五区| 亚洲成片在线观看12345| 精品欧美成人高清在线观看| 国产精品理论片| 女女同性av片在线观看免费| 国产片免费福利片永久| 国产成人精品一区二区三区无码| 色拍拍在线精品视频| 2020最新无码福利视频| 欧洲一卡2卡3卡4卡乱码视频| 亚洲成a人v欧美综合天堂麻豆| 久久综合色鬼综合色| 亚洲已满18点击进入在线观看| 国产av天堂亚洲国产av天堂| 香蕉久久福利院| 四虎永久在线精品视频免费观看| 久久99er精品国产首页| 国产成人拍精品视频午夜网站| 国产精品爽爽久久久久久竹菊| 综合欧美亚洲日本一区| 欧美亚洲精品一区二区| 玩弄japan白嫩少妇hd| 国精品无码av人妻受辱系| 又色又爽又黄的视频国内 | 国产97色在线 | 亚洲| 久久国产成人免费网站| 国产亚洲人成无码网在线观看|