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畢赤酵母表達系統的基本原理

日期:2023-07-17 16:19:10

畢赤酵母表達系統是一種常用的重組蛋白表達系統,其基本原理如下:
 
    畢赤酵母(Pichia pastoris)是一種單細胞真菌,具有高效的蛋白合成和分泌能力。該酵母可以利用甲醇作為碳源進行生長,并在高濃度甲醇誘導下表達外源蛋白。
 
    基因插入:將目標基因的DNA序列插入到畢赤酵母的表達載體中。通常使用可表達的質粒作為載體,其中包含啟動子、信號肽、選擇標記等功能元件。
 
    轉化:將重組表達載體導入畢赤酵母細胞內,通過轉化方法(如電穿孔或化學法)將外源基因導入酵母細胞的核。
 
    選擇標記:通過在載體表達引入選擇標記基因,如抗生素抗性基因,可以篩選出成功轉化的畢赤酵母細胞。
 
    培養與誘導表達:將篩選出來的重組畢赤酵母細胞進行培養,在適宜的溫度和培養基條件下,細胞會快速繁殖。當細胞達到一定密度后,向培養基中加入甲醇來誘導目標基因的表達。
 
    蛋白分泌與純化:經過甲醇誘導后,目標蛋白會在畢赤酵母細胞內合成并分泌到培養基中。可以通過離心、過濾等方法收集培養基,并使用親和層析、凝膠過濾等技術對目標蛋白進行純化和分離。
 
    畢赤酵母表達系統利用畢赤酵母細胞高效的蛋白表達和分泌能力,結合外源基因的插入、轉化、培養與誘導等步驟,實現外源蛋白的高效表達并進一步純化。這個系統被廣泛應用于重組蛋白的生產和研究領域。

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