在线日韩日本国产亚洲丨少妇伦子伦情品无吗丨欧美性猛交xxxx免费看蜜桃丨精品人妻系列无码一区二区三区丨亚洲精品无码不卡在线播放

Your Good Partner in Biology Research

哺乳細胞表達系統如何提高表達量?

日期:2023-06-09 13:48:33


    哺乳細胞表達系統是目前最常用的蛋白質表達與生產系統之一,廣泛應用于藥物研發、生物技術領域。然而,由于種種因素的影響(例如DNA序列、啟動子、信號肽、轉座子、轉染方式等),蛋白質在哺乳細胞中的表達量往往不能滿足實際需要。如何提高哺乳細胞表達系統的表達量,是一個備受關注的問題。本文就此進行探討。
 
一、優化啟動子
 
    啟動子是轉錄過程的起始位點,對基因表達調控起重要作用。常見的啟動子有CMV、SV40以及EF1α等。在哺乳細胞表達系統中,CMV啟動子是最為廣泛使用的啟動子之一,但是它在長時間表達時容易受到啟動子取向效應和剪切效應的影響,導致表達水平下降。此時,可以采用其他常用啟動子或構建自定義啟動子,或者在CMV啟動子的5'端添加增強子,來提高基因表達。
 
二、優化信號肽
 
    信號肽是蛋白質分泌過程中最重要的調控元件之一,它決定了蛋白質的定位和適當的反式折疊。因此,對信號肽進行優化也是提高哺乳細胞表達系統表達量的重要手段。常用的信號肽如Igκ、tPA、hGH等,可以根據不同的目標蛋白進行選擇或構建。
 
三、使用轉座子
 
    轉座子是一種廣泛存在于細菌和真核生物中的可移動遺傳元件,能夠引導DNA的自由運動,具有高效率和高精度的基因定位和修飾功能。因此,在哺乳細胞表達系統中使用轉座子可以有效提高基因表達。主要有Sleeping Beauty、piggyBac、Tol2等轉座子系統可供選擇,其中Sleeping Beauty應用最為廣泛。
 
四、優化細胞培養條件
 
    細胞培養條件是影響表達的另一個重要因素。哺乳細胞表達系統中,常用的細胞為CHO、HEK293、293F等細胞。在細胞培養過程中,溫度、CO2濃度、pH值、營養物質和培養時間等因素對細胞狀況及蛋白質表達效果都有著重要作用。因此,合理優化細胞培養條件可以提高蛋白質表達量。
 
五、采用輔助技術
 
    在哺乳細胞表達系統中,可采用以下輔助技術來優化基因表達。
 
    (1)使用流式細胞術篩選高表達細胞:通過熒光標記融合蛋白,利用流式細胞術分離高表達細胞,提高表達水平。
 
    (2)利用小分子化合物調節蛋白質表達:如butyrate和Na Butyrate可以促進CHO和HEK293細胞的表達,而dimethyl sulfoxide(DMSO)則能提高一些難表達的蛋白表達水平。
 
    (3)輔助蛋白質折疊和翻譯:如使用甘露醇、DMSO、輔酶Q10等小分子化合物,可以促進蛋白質折疊和翻譯,提高表達水平。
 
    優化哺乳細胞表達系統的表達量需要多方面的考慮,并非只有一個單一因素可以解決問題。需要針對具體的研究目的和實驗條件,選擇適當的優化方法和策略。


主站蜘蛛池模板: 亚洲中文字幕无码乱线| 成人午夜电影福利免费| 天堂а√在线地址8中文种子| 青青青国产在线观看资源| 最近最好的中文字幕2019免费| 国产一区二区三精品久久久无广告| 十八18禁国产精品www| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲中文字幕人成乱码| 国产在线观看无码免费视频| 8x8ⅹ在线永久免费入口| 亚洲性夜夜天天天| 欧洲 亚洲 国产图片综合| 动漫精品中文无码卡通动漫| 欧美成人片在线观看| 国产嫖妓风韵犹存对白| 成人毛片av免费| 亚洲伊人成综合网2222| 少妇久久久久久被弄到高潮| 久久www免费人成_看片| 午夜亚洲影院在线观看| 亚洲精品一区二三区不卡| 中国凸偷窥xxxx自由视频妇科 | 成人国产三级在线观看| 中文字幕丰满伦子无码| 国产成人8x人网站在线视频| 国产成人无码一区二区三区在线| 熟女少妇在线视频播放| 无码av免费一区二区三区四区| 免费的污污的网站在线观看| 2019nv天堂香蕉在线观看| 国产av精品毛片一区二区三区 | 性色av一区二区三区人妻| 亚洲国产精品久久久久婷婷老年| 少妇精品无码一区二区三区| 高清不卡毛片免费观看| 日韩免费无码成人久久久久久片| 精品无码国产av一区二区三区| 亚洲国产精品一区第二页| 一本aⅴ高清一区二区三区| 国产精品久久久久久久久久妞妞|