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組織外泌體提取方法有哪些?

日期:2023-06-08 13:40:14


    組織外泌體(Extracellular vesicles, EVs)通過分泌到細胞外部分泌物中傳遞信息。EVs在細胞間信號轉導和物質傳遞等方面起到了重要作用。而提取高純度、活性的EVs是進行研究的前提和基礎。本文將介紹常見的組織外泌體提取方法,并對其優缺點進行比較。
 
一、超速離心法
 
    超速離心法(Ultracentrifugation, UC)是目前最常用的提取組織外泌體的方法之一,其基本原理是通過離心分離樣品中不同密度的成分。UC的操作步驟包括:第一步低速離心去除細胞碎片和細胞核,第二步高速離心去除大小不同的顆粒(如微粒子),第三步超高速離心沉淀組織外泌體。UC具有高效、簡單等優點,但存在離心時間長、分離效果不穩定等缺點。
 
二、密度梯度離心法
 
    與UC類似,密度梯度離心法(Density gradient centrifugation, DGC)是一種通過離心分離出不同密度的成分的方法。與UC不同的是,DGC是通過在管內構建含有不同濃度的離子溶液梯度,利用泳動作用將泡膜小囊泡分離出來。DGC具有純度高、分選精度好等優點,但存在耗時長、操作復雜等缺點。
 
三、尺寸篩選法
 
    尺寸篩選法(Size-exclusion chromatography, SEC)是一種利用柱填料篩分樣品的方法,在制備EVs時可選擇膜孔大小與EVs顆粒大小相對應的填料進行分離。SEC的優點在于可以得到更為純凈的EVs,同時保留更多EVs的生物活性,但其缺點在于對前處理和柱填料的選擇要求高,通量也相對較低。
 
四、超濾法
 
    超濾法(Ultrafiltration, UF)是利用中空纖維膜或多孔膜濾除EVs,細胞碎片和其他大分子雜質。相比于其它方法,UF操作簡便、速度快,同時可以得到更為純凈的EVs,并且可以組合應用其他方法實現不同級別的分離和純化。但其缺點在于需要過濾器的選擇和膜孔大小的控制,同時不能分離不同密度的EVs。
 
    以上四種方法都是常用的提取組織外泌體的方法,每種方法都有其優缺點,在實際應用中需要選擇合適的方法。另外,隨著技術的發展和研究深入,不斷有新的EVs提取和純化技術被開發和改進,如抗體親和法、電泳法等,這些技術將進一步擴展EVs的應用范圍和研究內容。


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