op50大腸桿菌保存方法
日期：2023-06-02 11:39:14
OP50大腸桿菌是研究蛋白質(zhì)、基因和代謝過程等生命科學(xué)領(lǐng)域的重要模式生物。正確的保存方法可以確保OP50大腸桿菌在長(zhǎng)期儲(chǔ)存期間能夠保持細(xì)胞活力并保留其生物特性。以下是OP50大腸桿菌保存的具體方法和步驟：
一、常規(guī)保存方法
1、冷凍保存方法
將OP50大腸桿菌接種于LB（Luria-Bertani）培養(yǎng)基中，在室溫下振蕩培養(yǎng)12小時(shí)，然后在37℃下孵育12至16小時(shí)。隨后取3~5毫升培養(yǎng)物加入2毫升保護(hù)液（10%甘油或15%甘露醇），混勻后分裝到干燥、無菌的凍存管中，置于−80℃冰箱內(nèi)保存。
2、凍干保存方法
將OP50大腸桿菌接種于LB培養(yǎng)基中，使用振蕩培養(yǎng)器進(jìn)行培養(yǎng)，生長(zhǎng)至進(jìn)入穩(wěn)定生長(zhǎng)期后，收集細(xì)胞，離心去除培養(yǎng)基，用蒸餾水洗滌幾次，剩余部分離心干燥，以氟里昂為載體進(jìn)行凍干。將凍干樣品分裝入保護(hù)采血管中，置于−80℃冰箱內(nèi)保存。
二、細(xì)節(jié)流程
1、選擇優(yōu)質(zhì)菌株進(jìn)行保存
在進(jìn)行保存前，應(yīng)選擇優(yōu)質(zhì)、生長(zhǎng)正常、不受污染的OP50大腸桿菌菌株作為樣品。
2、收集細(xì)胞和離心
使用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)OP50大腸桿菌到穩(wěn)定生長(zhǎng)期后，使用離心機(jī)將細(xì)胞沉淀下來，去除培養(yǎng)基并用蒸餾水洗滌幾次。
3、加入保護(hù)劑
將細(xì)胞沉淀與10%甘油或15%甘露醇等保護(hù)劑混合均勻。
4、分裝至凍存管中
將混合樣品分裝至已經(jīng)消毒的凍存管中。
5、冷凍保存
放置已經(jīng)分裝好樣品的凍存管于−80℃冰箱中保存。
6、凍干保存（可選）
將混合樣品分裝至保護(hù)采血管中，以氟里昂為載體進(jìn)行凍干處理，放置于−80℃冰箱內(nèi)保存。
三、常見問題及解決方法
1、OP50大腸桿菌保存時(shí)間有多久？
經(jīng)過正確保存，OP50大腸桿菌可以被長(zhǎng)期保存，其保存時(shí)間一般為6個(gè)月至2年。但具體保存時(shí)間還需要考慮保存的溫度、細(xì)胞活力以及使用前的復(fù)蘇條件等因素。
2、如何判斷已經(jīng)保存的OP50大腸桿菌是否健康活躍？
可以通過下板培養(yǎng)的方式來判斷已存放的OP50大腸桿菌是否能夠生長(zhǎng)。同時(shí)，可以觀察存儲(chǔ)的樣品是否有細(xì)胞死亡或者出現(xiàn)了污染等情況。
3、冷凍保存和凍干保存哪種方式更好？
兩種保存方式各有優(yōu)缺點(diǎn)。相對(duì)來說，冷凍保存更為簡(jiǎn)便，但需要時(shí)常檢查是否將樣品意外破壞或發(fā)生溶解現(xiàn)象；凍干保存則相對(duì)耗費(fèi)時(shí)間成本高一些，但是樣品更加穩(wěn)定、易于長(zhǎng)期保存。一般而言，在實(shí)驗(yàn)室中，兩種保存方式皆可采用，需要根據(jù)不同情況來選擇合適的保存方法。
4、出現(xiàn)OP50大腸桿菌較多的污染情況如何處理？
一旦出現(xiàn)OP50大腸桿菌樣品污染，應(yīng)立即采取措施清洗、消毒設(shè)備和使用一次性材料來防止污染傳播。同時(shí)，不能使用這批污染的樣品，需要重新進(jìn)行保存或獲取新的樣品。
OP50大腸桿菌是研究生命科學(xué)領(lǐng)域的重要模式生物之一，存放好這一菌株對(duì)于維持實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性意義重大。采用適當(dāng)?shù)谋４娣绞胶土鞒蹋梢源_保OP50大腸桿菌在長(zhǎng)期儲(chǔ)存期間能夠保持其活力和特性。
