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外泌體超速離心法提取過程

日期:2023-06-02 11:19:40


    外泌體是細胞釋放到細胞外的一種小型囊泡,內(nèi)含有多種生物大分子,在許多生物學領(lǐng)域中都具有重要作用。然而,外泌體的純化和鑒定依然面臨諸多挑戰(zhàn),因此需要開發(fā)出更優(yōu)質(zhì)的提取方法。其中,超速離心法是一種常用的外泌體提取方法。

外泌體提取

    超速離心法的主要優(yōu)點在于可以快速、高效地分離外泌體,并且不會影響外泌體的生物活性。下面我們將詳細介紹超速離心法的提取過程。
 
1、培養(yǎng)細胞
    首先,需要在含有適當培養(yǎng)基、血清的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細胞。常用的細胞包括肝細胞、淋巴細胞、血小板等。在細胞密度達到一定值后,收集培養(yǎng)液進行離心。
 
2、離心
    將培養(yǎng)液離心,去除大量的細胞碎片和細胞核等雜質(zhì)。離心的條件通常為300g×10min,使其沉淀。此時,上清液中含有大部分的外泌體。


外泌體

 

 
3、再離心
    將步驟2的上清液再次離心,離心的條件通常為2000g×10min。此時,可以觀察到沉淀中含有較多的外泌體,但仍然存在一定的雜質(zhì)。
 
4、洗滌
    為了去除雜質(zhì),需要對第3步的沉淀進行洗滌。在無菌條件下,加入PBS緩沖液(含1%乙二醇),以適當速度攪拌渦流。洗滌過程通常進行3-5次,每次離心的條件為2000g×10min。
 
5、超速離心
    進行超速離心,以進一步純化外泌體。將洗滌后的沉淀再次離心,離心的條件通常為12000g×30min,或者在超高速離心機中進行離心,離心的條件為110000g×70min。此時,干凈的外泌體已經(jīng)濃縮在沉淀中,可以直接收集并用于后續(xù)實驗。
 
    超速離心法是一種簡單直接、高效快捷、生物活性好的外泌體提取方法。在使用這個方法的時候需要注意消毒、避免污染等問題,以保證外泌體的質(zhì)量和純度。


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